CTAB法抽提真菌DNA.docVIP

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2020-01-26 发布于河北
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CTAB法抽提真菌DNA.doc

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CTAB法抽提真菌DNA

提取液： 1M Tris.HCl pH8.0 10ml 0.5M EDTA pH8.0 4ml CTAB 2g NaCl 8.176g 巯基乙醇 2ml（使用时加入）加70ml ddH2O溶解定容至98ml 步骤：在液氮中研磨菌丝体，直到菌丝体研磨成解决白色细粉将菌丝体装入1.5ml离心管中，加入600μlCTAB提取液，于62-65℃水浴中加热1h，间或振荡数次加入600μlTris饱和酚：氯仿：异戊醇（25:24：1），【现用现配，按比例混匀后再加入管中】，温和振荡几次，然后在12000rpm下离心15分钟取上清至新的离心管中，然后加入1/10体积的3M/L NaAc，1倍体积的异丙醇，轻柔混匀，在-20℃下静置30-60分钟，在12000rpm下离心5分钟离心后去上清，沉淀用70％乙醇润洗2次加入适量的TE缓冲液溶解沉淀，加入1μl RNase（10mg/ml）37℃水浴1小时加入1倍体积的饱和酚：氯仿：异戊醇（25:24：1），【现用现配，按比例混匀后再加入管中】，温和振荡几次，然后在12000rpm下离心15分钟，取上清至新的离心管加入1倍体积的氯仿，温和振荡几次，在12000rpm下离心15分钟，取上清至新的离心管中加入2倍体积无水乙醇，-20℃静置30分钟以上，8000rpm离心12分钟去除上清，沉淀用70％乙醇润洗2次，加入100μl TE缓冲液溶解沉淀，放入-20℃存放，待电泳检测