苏教版高中生物选修2生物科学与社会基因工程制药.pptVIP

* 1.大肠杆菌的质粒转化 （1）钙离子转化法 （2）电转化法 （3）大肠杆菌的?噬菌体转染 （1）钙离子转化法 适用于革兰氏阴性菌（如大肠杆菌），利用钙离子与细菌细胞膜磷脂在低温下形成液晶结构，这一状态下的细胞称为感受态细胞。此时细胞经过热脉冲发生收缩作用，细胞膜出现间隙，此时质粒DNA可通过进入细胞。 （2）电穿孔法 将待转化的质粒或DNA重组连接液加在电穿孔转化仪的样品池中，两极施加高压电场。在强大电场的作用下，细菌细胞壁和细胞膜产生缝隙，质粒或DNA重组分子便可进入细胞内。电穿孔转化法操作简单，而且几乎对所有含细胞壁结构的受体细胞均有效，但转化效率差别很大。 （3）大肠杆菌的?噬菌体转染 2.酵母的质粒转化方法 （1）乙酸锂转化法 （2）原生质体转化法 （3）电转化法 （二）转化率 转化率----单位质量的质粒转化大肠杆菌产生转化子的数量。 钙离子转化法：106--109/ug 超螺旋质粒 电转化法： 108--1010 /ug 超螺旋质粒 例如，pUC18对大肠杆菌的转化率为108，即每微克pUC18中只有108个分子能进入受体细胞。一微克pUC18共有3.4×1011个分子（6.02×1017 / 2686×660），即每3400个pUC18分子才有一个分子进入受体细胞 在实际操作过程中，转化一微克pUC18共需2ml感受态细胞，大约含有2