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[答案] (1)动物细胞培养 (2)亲本细胞 具有同核的细胞 灭活的病毒 (3)特异性强,灵敏度高,并可大量制备 (4)在体外大量增殖 分泌专一抗体 克隆化培养 抗体检测 细胞培养液 小鼠腹水 (5)骨髓 造血干 (2015·潍坊检测)下列关于单克隆抗体制备过程的叙述,正确的是( ) A.制备过程中不需要动物细胞培养技术 B.杂交瘤细胞具有B淋巴细胞与癌细胞的所有特点 C.经选择性培养基筛选出来的杂交瘤细胞即可用于单克隆抗体的生产 D.单克隆抗体最广泛的用途是用作体外诊断试剂 [答案] D [解析] 将骨髓瘤细胞与经过免疫的B淋巴细胞融合,得到杂交瘤细胞,经过选择性培养基的筛选并经单一抗体检测后,培养能产生特定抗体的杂交瘤细胞才可得到单克隆抗体,杂交瘤细胞能无限繁殖但不具有癌细胞的转移能力。 思 维 升 华 1.植物体细胞杂交和动物细胞融合的区别 项目 细胞融 合原理 细胞融 合方法 诱导因素 用途 植物体 细胞杂 交 细胞膜的流动性 去除细胞壁后诱导原生质体融合 离心、电激、聚乙二醇等 克服远缘杂交不亲和的障碍,获得杂种植株 动物细 胞融合 细胞膜的流动性 使细胞分散后,诱导细胞融合 离心、电激、聚乙二醇、灭活的病毒等 制备单克隆抗体等 2.动物细胞融合与受精作用的区别 (1)受精作用是在同种生物之间进行的,精子与卵细胞的融合不需要任何诱导剂,就能形成受精卵,受精卵内具备同种生物的两个亲本的遗传物质。 (2)动物细胞融合是在不同物种间进行的细胞融合,由于物种间存在生殖隔离,所以自然条件下不能融合成杂交细胞,必须有诱导剂作用才能融合。形成的杂交细胞具备两个亲本细胞的遗传物质,从而体现两个亲本的遗传特性。 3.制备单克隆抗体时,选用B淋巴细胞和骨髓瘤细胞融合的原因 哺乳动物感染抗原后,其体内会形成相应的效应B淋巴细胞,效应B淋巴细胞能分泌相应的抗体凝聚或杀死这些抗原。动物在免疫反应的过程中,每一种效应B淋巴细胞能分泌一种特异性抗体,要想获得大量的特异性抗体,必须使能分泌该单一抗体的效应B淋巴细胞大量增殖。效应B淋巴细胞具有产生单一抗体的能力,但不能在体外增殖;骨髓瘤细胞能在体外培养条件下无限增殖,但不能产生抗体。因此,把一种效应B淋巴细胞与骨髓瘤细胞进行细胞融合,产生杂交瘤细胞,它会兼有两个亲本细胞的特性,在体外培养条件下能不断增殖,同时能产生出某种特异性的抗体。 4.动物细胞融合、单克隆抗体制备与动物细胞培养的区别与联系 动物细胞融合是指两个或多个动物细胞结合形成一个细胞的过程,也叫细胞杂交。杂交细胞是具有两个或多个细胞遗传信息的单核细胞。杂交细胞的形成需要人工诱导,常用的诱导因素有聚乙二醇(PEG)、灭活的病毒、电激等。融合的细胞要繁殖就要进行动物细胞的培养,通过动物细胞的培养,杂交细胞表现出两个亲本各自的优良特点。 单克隆抗体的制备,首先应获得杂交瘤细胞,其过程是用已免疫的效应B淋巴细胞和骨髓瘤细胞杂交获得三种融合细胞:BB细胞、B瘤细胞、瘤瘤细胞,然后用选择培养基筛选获得杂交瘤细胞,杂交瘤细胞要发挥其繁殖快,产生特异性抗体的优点,应通过动物细胞培养才能实现。所以无论是动物细胞融合还是单克隆抗体的制备,都是以动物细胞培养为基础的。 知 识 构 建 应 用 探 究 人绒毛膜促性腺激素(HCG)是女性怀孕后胎盘滋养层细胞分泌的一种糖蛋白,制备抗HCG单克隆抗体可用于早孕的诊断。下图是抗HCG单克隆抗体制备流程示意图,请分析回答: (1)制备单克隆抗体过程中要用到________和________技术。 (2)制备单克隆抗体过程中,给小鼠注射的HCG相当于________,使小鼠产生分泌相应________的淋巴细胞,此过程属于特异性免疫中的________免疫。 (3)在细胞内DNA合成一般有两条途径,主途径是在细胞内由糖和氨基酸合成核苷酸,进而合成DNA,而氨基嘌呤可以阻断此途径。另一辅助途径是在次黄嘌呤和胸腺嘧啶核苷存在的情况下,经酶催化作用合成DNA,而骨髓瘤细胞的DNA合成没有此辅助途径。 ①利用DNA合成途径不同的特点配制的HAT培养基(含有次黄嘌呤、氨基嘌呤和胸腺嘧啶核苷的细胞培养基)含有多种成分,其中添加的________成分具有筛选杂交瘤细胞的作用。 ②最终筛选获得的杂交瘤细胞的特点是________________________________ (4)此过程生产的单克隆抗体可以与________特异性结合,从而诊断早孕。 [解析] (2)通过分泌抗体来消灭抗原的过程属于体液免疫。(3)经细胞融合处理过的细胞中,能在体外无限增殖的有瘤细胞、瘤—瘤杂交细胞以及杂交瘤细胞。而根据题中信息可知,骨髓瘤细胞和瘤—瘤杂交细胞的DNA合成没有“次黄嘌呤和胸腺嘧啶核苷”的辅助途径,只能进行由糖和氨
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