前处理在分析测试中应用实例-教材版.ppt

前处理在分析测试中的应用 中山大学测试中心 陆慧宁 掌握样品前处理方法的意义 前处理是用好仪器的前提 前处理是拓展仪器使用范围的途径 在科学合理使用仪器的前提下，前处理水平直接影响仪器使用水平 利用手中的仪器可以去解决尽可能多的问题，应该是分析人员追求的目标 玩仪器，玩分析，是分析人的一种境界 分两部分内容 一、前处理分类概述 二、分类应用实例 （重点） 定量分析前处理 1、经典的前处理程序：萃取、净化 仪器的选择性越来越高 前处理的步骤逐步简化 最热门的分析领域是食品安全。农药和药物残留分析。趋向于多残留分析，利用质谱的SIM技术和SM/SM技术排除干扰，提高分析灵敏度 农药残留分析多使用GC-MS 萃取：有机溶剂 净化：小柱、SPE小柱 药物残留分析较多使用 HPLC-MS 萃取：乙腈、甲醇、水 净化：离心、冷冻高速离心、滤膜过滤 建立分析前处理方法简例一：咸鱼制品中农药敌敌畏的测定 参考以下标准的前处理 GB/T 19650-2005 动物组织中437种农药多残留测定方法 气相色谱-质谱和液相色谱-串联质谱法 咸鱼（鱼干）样品情况分析 与GB/T 19650-2005所述样品对比： 含水量低 含油脂量高（经测定，淡水鱼干含油脂达到30%） 确定萃取方法 确定萃取物中主要的干扰物（GC-MS Full scan） 大量油脂 有机酰胺 长链脂肪酸类 建立针对各种干扰物的净化方法 咸鱼提取液除油脂后的GC-MS总离子流图 去除大量油脂的方法1 参考国标：凝胶色谱法（GPC） 凝胶渗透色谱 ——GPC  (Gel Permeation Chromatography) 凝胶色谱法的优点 按照分子大小分离，无吸附作用，使用简便 分析物回收率好 分析柱可以重复使用 易于自动化 凝胶渗透色谱用于农残分析 待分离目标物化学结构分析： 净化用GPC凝胶色谱 一、自动化装置（商品化、组装） 二、实验室简易凝胶色谱柱 自动凝胶色谱仪的组成 1 自动进样器 2 凝胶色谱柱 3 一台稳定的无脉冲泵 4 检测器 5 馏分收集器 自制简易凝胶色谱仪 1 凝胶色谱柱 2 一台稳定的无脉冲泵（可以用蠕动泵） 3 馏分自动收集器 二、实验室简易凝胶色谱柱 1 凝胶色谱柱 2 不使用泵（以高位液槽代替） 3 流分自动收集器（无条件时可以人工收集） 简易GPC柱 GPC柱的装填 1、选定凝胶填料，在本标准中采用Bio-Breads S-X3填料。 2、选定净化柱规格 标准要求200mm *25mm 3、选定流动相（环己烷-乙酸乙酯 1：1） 4、预测定树脂在流动相中的膨胀率，按照需要量浸泡凝胶树脂过夜，然后装柱 5、装柱要求均匀（均匀轻敲柱身、连续匀速装填、保持溶剂液面高于填料） 6、填装完毕后，流动相在柱子中慢速流动以使柱子达到平衡 在流动相不变的情况下，一根装好的GPC柱有很好的重现性，可以反复使用。 在使用前，应当标定GPC柱，即做出目标物和污染物在该柱的流出曲线 在食品安全分析中，凝胶色谱柱的用途主要在于分离去除分子量大的油脂和色素 黄瓜中有机磷农药残留分析 用GPC脱除黄瓜提取液的叶绿素过程 油脂与农药在GPC柱上的分离 GPC柱上洗脱情况分析 农药与油脂的分子大小差异大，在GPC上获得很好的分离 回收曲线显示，收集120-190mL流分能完全回收农药 优点：去除率高、农药回收好，理论上无损失 缺点：大量溶剂、大量时间、需要特殊设备、投 入 高 去除大量油脂的方法2 硅胶小柱分离 硅胶小柱分离方法的建立 原理：硅胶吸附层析原理 属于正相层析，按照极性大小分配。极性大的物质与硅胶的相互作用力大，难洗脱 选择适当洗脱剂是关键 1. 薄层色谱法选择溶剂系统 2. 上柱测定油脂与农药洗脱曲线选择分离条件 目的和要求：好的洗脱溶剂，应该是能够将污染成分尽可能去除，而被测成分完全保留 方法：调整二氯甲烷:乙酸乙酯洗脱剂系统的比例，使得油脂能完全洗脱而农药不流出。 收集流出液计算油脂回收率 用GC监控农药流出情况 结果：找到最优淋洗条件：二氯甲烷:乙酸乙酯=98：2 找到回收农药洗脱条件：乙酸乙酯：丙酮=1：1 3. 确定硅胶和各溶剂用量 按照样品的实际情况进一步优化硅胶用量、 脱脂溶剂用量、洗脱农药溶剂用量 按要求烧制特制玻璃小柱： K-D浓缩器装置图 小柱分离 优点：溶剂用量小、时间省、设备投入低 缺点：去除油脂率相对较低，硅胶吸附损失、操作较繁锁，无自动化 经典柱