十五叶绿体的分离与荧光观察.pptVIP

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2019-07-02 发布于天津
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十五叶绿体的分离与荧光观察.ppt

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实验十五叶绿体的分离与荧光观察选做综合性实验学时实验目的通过植物细胞叶绿体的分离了解细胞器分离的一般原理和方法观察叶绿体的自发荧光和次生荧光熟悉荧光显微镜的使用方法实验原理将组织匀浆后悬浮在等渗介质中进行差速离心是分离细胞器的常用方法叶绿体的分离应在等渗溶液或蔗糖溶液中进行以免渗透压的改变使叶绿体受到损伤将匀浆液在的条件下离心以除去其中的组织残渣和一些未被破碎的细胞然后在的条件下离心即可获得沉淀的叶绿体实验用品和材料材料新鲜菠菜用品离心机捣碎机荧光显微镜试剂吖啶橙实验方法新鲜菠菜加捣碎的匀浆层纱

实验十五叶绿体的分离与荧光观察（选做，综合性实验，6学时）实验目的通过植物细胞叶绿体的分离，了解细胞器分离的一般原理和方法。观察叶绿体的自发荧光和次生荧光，熟悉荧光显微镜的使用方法。实验原理将组织匀浆后悬浮在等渗介质中进行差速离心，是分离细胞器的常用方法。叶绿体的分离应在等渗溶液（0.35mol/L NaCl或0.4mol/L 蔗糖溶液)中进行,以免渗透压的改变使叶绿体受到损伤.将匀浆液在1000r/min的条件下离心2 min,以除去其中的组织残渣和一些未被破碎的细胞。然后，在3000r/min的条件下离心5 min,即可获得沉淀的叶绿体。实验用品和材料材料：新鲜菠菜用品：离心机；捣碎机；荧光显微镜试剂： 0.35mol/L NaCl 0.1%吖啶橙实验方法新鲜菠菜30g(加150ml NaCl) 捣碎(5000r/min的)匀浆3-5 min 6层纱布过滤取滤液4ml 1000r/min离心2 min,弃沉淀上清夜在3000r/min离心5 min,弃上清,沉淀即为叶绿体将沉淀用0.35mol/L NaCl溶液悬浮取悬液一滴于载玻片上,加盖片在普通显微镜下观察取悬液一滴于载玻片上,再加一滴0.1%吖啶橙, 加无荧光盖片,在荧光显微镜下观察实验结果普通光镜下,可看到叶绿体为绿色橄榄形,在高倍镜下可看到叶绿体内部含有较深的绿色小颗粒,即基粒。以Olympus荧光显微镜为例，在选用B（blue）激发滤片，B双色镜和O530（orange）阻断滤片的条件下，叶绿体发出火红色荧光。在加入吖啶橙染色后，叶绿体可发出橘红色荧光，而其中混有的细胞核则发绿色荧光。思考题叶绿体分离的实验原理是什么？在分离叶绿体时应注意哪些问题？普通显微镜和荧光显微镜有何异同？ * * *