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生物工程学报黄瑜等雏番鸭细小病毒蛋白的原核表达及增殖病毒的检测动物及兽医生物技术黄瑜朱于敏董世娟于瑞嵩张源淑李震摘要近年来番鸭细小病毒出现新的流行趋势估计与病毒基因变异有关因此针对新流行毒株研发新的检测方法很有必要本研究根据番鸭细小病毒年分离株的全基因序列设计了一对特异性引物利用技术扩增全长基因经鉴定正确后进行同源性比对分析同时将其克隆到载体构建成原核表达载体经转化及诱导后电泳和分析表达出与预期大小相符的的蛋白该蛋白可与临床采集的免疫过的番鸭血清结合说明该蛋白可用于的血清学检测将纯化后蛋白免疫新
生 物 工 程 学 报 黄瑜 等/雏番鸭细小病毒VP3 蛋白的原核表达及增殖病毒的检测 65
Chinese Journal of Biotechnology
/cjbcn January 25, 2015, 31(1): 65−74
DOI: 10.13345/j.cjb.140150 ©2015 Chin J Biotech, All rights reserved
动物及兽医生物技术
vp3
1* 2* 2 2 1 2
黄瑜 ，朱于敏 ，董世娟 ，于瑞嵩 ，张源淑 ，李震
1 210095
2 201106
, , , . vp3 . , 2015, 31(1):
65–74.
Huang Y, Zhu YM, Dong SJ, et al. Prokaryotic expression of vp3 gene of Muscovy duck parvovirus, and its antiserum
preparation for detection of virus multiplication. Chin J Biotech, 2015, 31(1): 65–74.
摘 要: 近年来，番鸭细小病毒出现新的流行趋势，估计与病毒基因变异有关，因此针对新流行毒株研发新
的检测方法很有必要。本研究根据番鸭细小病毒 (MDPV) 2012 年分离株 SAAS-SHNH 的全基因序列，设计了
一对特异性引物，利用PCR 技术扩增全长 vp3 基因，经鉴定正确后，进行同源性比对分析，同时将其克隆到
PET28a 载体，构建成PET28a-VP3 原核表达载体，经转化及IPTG 诱导后，SDS电泳和Western blotting
分析，表达出与预期大小相符的63.1 kDa 的蛋白，该蛋白可与临床采集的免疫过MDPV 的番鸭血清结合，说
明该蛋白可用于MDPV 的血清学检测。将纯化后蛋白免疫新西兰大白兔，制备兔源MDPV-VP3 蛋白的多克隆
抗体，制备的兔源血清能够与MDPV 疫苗弱毒株及J3D6 株 VP3 蛋白发生特异结合；MDPV 感染原代鸭胚成
纤维细胞 (DEF) 后，利用兔源血清作为一抗进行免疫荧光分析 (IFA) 分析，在 DEF 细胞核和细胞质内均能
检测到VP3 蛋白，表明利用VP3 蛋白制备的抗血清可以用于MDPV 免疫荧光分析细胞增殖病毒的检测。这为
今后MDPV 的快速检测提供了技术基础。
: MDPV ，vp3 基因，原核表达，纯化，免疫荧光分析
Received: March 14, 2014; Accepted: May 26, 2014
Supported by: Shanghai Technological Innovation Action Plan (No. 12231204502).
Corresponding author: Yuanshu Zhang. Tel: +86-25 E-mail: zhangyuanshu@
Zhen Li. Tel: +86-21 E-mail: zhenli60@163.com
∗
These authors contributed equally to this study.
上海科技创新行动计划 (No. 12231204502) 资助。
2014-06-16 /kcms/doi/10.13345/j.cjb.140150.html
66 ISSN 1000-3061 CN 11-1998/Q Chin J Biotech January 25, 2015 Vol.31 No.1
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