外来化合物对细胞生理代谢的影响急性ZnCl2染毒对小麦幼苗SOD活力影响.docVIP

山 西 大 学 本科实验报告 学　　院　　　　生命科学学院　　　　　　　　 学生姓名　 　钟日龙　　　　　　　　　　 专　　业 生物工程 　　　　　　　　　 学　　号 2009316044 　 年　　级 2009级 　 指导教师 李翠兰 教务处制表 二Ο一一 年 十二 月 二十 日 外来化合物对细胞生理代谢的影响 ——急性ZnCl2染毒对小麦幼苗SOD活力影响 钟日龙 （山西大学 生命科学学院 山西 太原 030006） 摘要：本实验以急性ZnCl2和小麦幼苗为实验材料，研究了不同浓度(ZnCl2的浓度分别是100mg/mL、200mg/mL、400mg/mL、800mg/mL、1600mg/mL)对小麦幼苗生理活性的影响，初步阐明了Zn+2对小麦幼苗的毒害机理。结果表明，结果以浓度400 mg/mL处理最佳,能够显著促进小麦根系的生长,根长、根重和根系活力分别比对照显著提高。在Zn+2胁迫下，随处理浓度的升高，小麦幼苗叶片中超氧化物歧化酶(SOD)活性呈上下波动的趋势。通过对各组SOD值的分析可知，浓度小于100mg/L的Zn+2促进SOD同工酶的表达，浓度大于800mg/L的Zn+2抑制SOD同工酶的表达，中间浓度呈波动性影响， 低浓度的ZnCl2可诱导小麦幼苗SOD的表达，而高浓度的ZnCl2会抑制SOD的活性。 关键词：外来化合物； ZnCl2； 小麦幼苗组织； SOD酶活性 1.材料与方法 1.1实验材料 1.1.1材料：小麦幼苗:实验室固体培养基中培养 1.1.2试剂：0.05mol/l PBS缓冲液（PH7.0） SOD试剂盒 冰醋酸 5个不同浓度ZnCl2溶液（100mg/l 200mg/l 400mg/l 800mg/l 1600mg/l） 1.1.3器材：离心机 分光光度计 天平 恒温水浴锅 冰浴 微量移液器（100ul 50ul） 研钵 离心管 一次性塑料管 1.2实验方法 1.2.1 ZnCl2染毒处理实验及粗酶提取液的制备 浸种5-6 h，萌发24-36h后将露白的种子随机摆放于培养皿中，30-40粒/皿左右，生长7天后，分别用不同浓度的ZnCl2溶液处理9天后，取茎叶0.2-0.3g，按1:20加入遇冷的PBS液（1/3用于研磨，2/3用于清洗，小范围研磨，便于冲洗），冰浴研磨，倒入离心管，并用剩余的PBS液冲洗入离心管。8000rpm离心15min，上清液即为5%的粗酶提取液，用于SOD酶活性的测定。 1.2.2总SOD酶活力测定（按下表进行） 试剂 测定管（4个） 对照管（1个） SOD试剂1 1ml 1ml 粗酶提取液 40ul -- 蒸馏水 -- 40ul SOD试剂2 0.1ml 0.1ml SOD试剂3 0.1ml 0.1ml SOD试剂4 0.1ml 0.1ml 充分摇匀，置37 显色剂 2ml 2ml 混匀，室温放置10min，于波长550nm处，1cm光径比色杯，蒸馏水调零，比色，测定各管OD值。 2.结果与分析 2.1小麦茎叶SOD酶活力测定结果 注：1%的粗酶提取液稀释倍数为100倍/g 第一组小麦茎叶SOD酶活力测定结果（0mg/l ZnCl2处理9天）（表1） 测定管（4个） 对照管 1个 1 2 3 4 OD值 1.152 1.150 1.167 1.140 1.167 总SOD酶活力（u/g） 0.967×102 1.096×102 1.096×102 1.741×102 SOD平均值±标准差 (1.225±0.349) ×102 第二组小麦茎叶SOD酶活力测定结果（100mg/l ZnCl2处理9天）（表2） 测定管（4个） 对照管 1个 1 2 3 4 OD值 1.089 1.016 1.030 1.052 1.163 总SOD酶活力（u/g） 4.788×102 9.511×102 8.606×102 7.182×102 SOD平均值±标准差 (7.522±2.059) ×102 第三组小麦茎叶SOD酶活力测定结果（200mg/l ZnCl2处理9天）（表3） 测定管（4个） 对照管 1个 1 2 3 4 OD值 1.146 1.146 1.144 1.135 1.165 总SOD