血红蛋白的提取.pptVIP

阅读P64回答： 1、凝胶色谱法利用的是蛋白质的哪个性质？ 2、该方法中哪种物质是关键？如何起到分离作用？ 阅读P66回答 1、电泳方法有哪些？本书采用的是哪种？ 2、SDS的作用？ 如果凝胶色谱柱装填得很成功、分离操作也正确的话，能清楚地看到血红蛋白的红色区带均匀、狭窄、平整，随着洗脱液缓慢流出；如果红色区带歪曲、散乱、变宽，说明分离的效果不好，这与凝胶色谱柱的装填有关。 3、你能观察到蛋白质的分离过程中红色区带的移动吗？请描述红色区带的移动情况，并据此判断分离效果？ 作业 完成《血红蛋白的提取和分离》学案巩固1、巩固2、例1；随堂达标检测1、3；活页1、3、5、7 5月15日 作业 完成《血红蛋白的提取和分离》学案全部 5月16日 教学反馈 1．凝胶色谱法是根据（ ）分离蛋白质的有效方法。 A分子的大小 B相对分子质量的大小 C带电荷的多少 D溶解度 2．缓冲液的作用是：在一定范围内，抵制外界的影响来维持（ ）基本不变。 A温度 B pH C渗透压 D氧气浓度 3．电泳是指带电粒子在电场的作用下向着与其所带电荷（ ）的电极移动。 A相同 B相反 C相对 D相向 4. 哺乳动物和人的成熟的红细胞中的（ ）与氧气的运输有关。 A血红蛋白 B肌红蛋白 C肌动蛋白 D肌球蛋白 B B B A 蛋白质分离的原理： 根据蛋白质各种特性的差异，如分子的形状和大小、所带电荷的性质和多少、溶解度、吸附性质和对其他分子的亲和力等等，可以用来分离不同种类的蛋白质。 一、基础知识 （一） 凝胶色谱法 2.凝胶： 大多数凝胶是由多糖类化合物（如葡聚糖或琼脂糖）构成的多孔小球体，内部有许多贯穿的通道。 1.原理： 3.凝胶色谱法分离蛋白质的具体过程 ①______________ 的蛋白质容易进入凝胶内部的通道，路程较___，移动速度较____; ②_______________的蛋白质无法进入凝胶内部的通道，只能在凝胶外部移动，路程较___，移动速度较____。 相对分子量较小 长 慢 相对分子量较大 短 快 （二）缓冲溶液 1.作用: 3.缓冲溶液的配制: 4.在本课题中使用的缓冲液是:磷酸缓冲液 如何证明凝胶色谱法获得的蛋白质是目的蛋白？ 2.组成： 如H2CO3/NaHCO3，NaH2PO4/Na2HPO4等 （三） 电泳： 1.概念： 带电粒子在电场作用下发生迁移的过程。 类型: 琼脂糖凝胶电泳、聚丙烯酰胺凝胶电泳。 电泳检测结果 电泳 1、用凝胶色谱法分离蛋白质的过程中，关于蛋白质的叙述，正确的是 A 相对分子质量较小的蛋白质行程大于相对分子质量较大的蛋白质 B 相对分子质量较小的蛋白质行程小于相对分子质量较大的蛋白质 C 相对分子质量较小的蛋白质行程等于相对分子质量较大的蛋白质 D 二者根本无法比较 3、使用SDS-聚丙烯酰胺电泳过程中，不同蛋白质的电泳迁移率完全取决于 A 电荷的多少 B 分子的大小 C 肽链的多少 D 分子形状的差异 二、实验操作 样品处理→粗分离→纯化→纯度鉴定 蛋白质提取和分离步骤 血液 血浆 水 分 固体物质： 血浆蛋白、无机盐、磷脂、葡萄糖等 血细 胞 白细胞 血小板 红细胞 （最多） 血红蛋白 （90％） 两个α－肽链 两个β一肽链 四个亚铁红素基团 血液有哪些成分？ （一）血红蛋白 血红蛋白 两个α－肽链 两个β一肽链 四个亚铁血红素基团 每个肽链环绕一个亚铁血红素基团，此基团可携带一分子氧或一分子二氧化碳，血红蛋白因含有血红素而呈红色。 血红蛋白的特点： 用鸡的红细胞提取DNA，用猪、牛、羊的红细胞提取血红蛋白的原因是什么？ 鸡的红细胞具有细胞核，含有DNA，便于进行DNA的提取；人的红细胞无细胞核，结构简单，血红蛋白含量丰富，便于提取血红蛋白。 (1)红细胞的洗涤: ①洗涤目的: 去除杂蛋白，以利于后续血红蛋白的 分离纯化，洗涤次数不可过少。 ②洗涤操作： 1、采集血样。 2、低速短时间离心（速度越高和时间越长，会使白细胞和淋巴细胞等一同沉淀，达不到分离的效果） 3、吸取血浆：上层透明的黄色血浆。 4、盐水洗涤：用五倍体积的质量分数为0.9％的氯化钠溶液洗涤。 5、低速离心（低速短时间） 6、重复4、5步骤三次，直至上清液中已没有黄色，表明洗涤干净。 1.样