仿生细胞膜技术于分析中药活性成分.docxVIP

陈晓萍 陈晓萍 复旦 大 学硕 士 学位 论 文 摘 要 中 药 的 活 性 成 分 研 究 一 直 是 一 个 重 要 的 研 究 方 向 。传 统 的 中 药 研 究 方 法 是 通 过 提 取 中 药 中单 一 成 分 或 制 备 提 取 物 进 行 药 理 实 验 确 定 有 效 成 分 ， 这 种 方 法 步 骤 繁 琐 ， 劳 动 强 度 高 ， 且 成 功 的概 率 低 。近 年 来 高 通 量 筛 选 被 应 用 于 中 药 活 性 成 分 筛 选 中 ， 可 以大 大 减 少 活 性 筛 选 周 期 并 节 省 试 样 量 。 药 物 的 活 性 己被 证 明 与 其 生 物 膜 通 透 性 有 关 ，脂 质 体 因 与 生 物 膜 具 有 类 似 结 构 常 用 于 模 拟 生 物 膜 研 究 药 物 的 生 物 膜 通 透 性 。 在 第 一 章 中 ， 我们 建 立 了荧 光 脂 质 体 模 型 并 将 其 应 用 于 评 估 中药 单 体 的 生 物 膜 通 透 性 ，借 此 预 测 中药 的 活 性 成 分 。其 基 本 原 理 如 下 : 用 两 种 常 用 的荧 光 探 针 O 尸日、下M A 一O 尸日标 记 脂 质 体 ， 中 药 单 体 进 入 荧 光 脂 质 体 中 ， 聚 集 在 荧 光 探 针 周 围 ， 将 对 荧 光 探 针 造 成 荧 光 淬 灭 ，通 过 测 定 与 中 药 单 体 作 用 前 后 荧 光 脂 质 体 的 荧 光 强 度 ， 计 算 荧 光 淬 灭 率 ， 借 此 推 断 中 药 单 体 进 入 脂 质 体 的 量 ， 预 测 中 药 单 体 的 生 物 膜 通 透 性 。 为 了 验 证 上 述 荧 光 脂 质 体 模 型 用 于 预 测 中 药 单 体 的 生 物 膜 通 透 性 的 可 行 性 ， 在 第 二 章 中 ， 用 荧 光 探 针 O 尸日 标 记 红 细 胞 膜 ， 用 中 药 单 体 引 起 的 红 细 胞 膜 荧 光 淬 灭 率 来 评 估 中 药 单 体 的 细 胞 膜 通 透 性 ， 并 与 第 一 章 中 建 立 的 荧 光 脂 质 体 模 型 比较 ，发 现 二 者 的 相 关 性 很 好 ，相 关 系 数 为 0 .9 3 ，说 明本 研 究 所 提 出 的 用 荧 光 脂 质 体 考 察 中 药 单 体 的 生 物 膜 通 透 性 是 可 行 的 。 上 述 荧 光 脂 质 体 模 型 可 以 实 现 对 中 药 单 体 的快 速 、 准 确 、 高 通 量 的筛 选 ， 但 是 仍 存 在 局 限 性 。 中 药 具 有 多 组 分 、 多 靶 点 的 作 用 特 性 ， 它 所 体 现 的 疗 效 是 整 体 作 用 的 结 果 ， 因此 需 要 将 它 视 为 一 个 整 体 进 行 研 究 。 因 此 ， 在 第 三 章 中 ， 我 们 建 立 了 一 种 全 新 的 利 用 脂 质 体 模 拟 生 物 膜 筛 选 中 药 中生 物 膜 通 透 性 成 分 的 研 究 模 式 ， 以 中 药 提 取 物 为 对 象 ，采 用 高 效 液 相 色 谱 技 术 ， 分 析 比较 中 药 提 取 物 与 脂 质 体 作 用 前 后 的 色 谱 图 ，根 据 色 谱 图 中 组 分 峰 面 积 的 变 化 情 况 判 断 药 物 与 脂 质 体 的 作 用 程 度 ， 峰 面 积 减 少 越 多 显 示 此 种 组 分 进 入 脂 质 体 中 的 量 越 多 ， 由此 从 中 筛 选 出 能 与 脂 质 体 结 合 的 组 分 ，预 测 中药 的 活 性 成 分 。 我 们 将 上 述 研 究 模 式 应 用 于 药 效 基 础 研 究 比较 深 入 的 金 银 花 的研 究 中 ，鉴 定 出 8 个 能 与 脂 质 体 结 合 的 成 分 (绿 原 酸 、 咖 啡 酸 、 3 ，5 一二 咖 啡 酞 奎 宁 酸 、 芦 丁 、 金 丝 桃 昔 、木 犀 草 普 、 棚 皮 素 、 木 犀 草 素 )，这 些 成 分 都 是 已知 的金 银 花 中 的 主 要 活 性 成 分 ， 说 明所 建 立 的 脂 质 体 模 型 可 初 步 筛 选 中药 的 活 性 成 分 。 在 最 后 一 章 中 ，我 们 应 用 第 三 章 所 提 出 的 筛 选 模 式 进 行 丹 参 的 生 物 膜 通 透 性 成 分 的 研 究 ，鉴 定 出 ，2 个 能 与 脂 质 体 相 互 作 用 的成 分 (丹 参 素 、 原 儿 茶 酸 、 原 儿 茶 醛 、香 草 酸 、咖 啡 酸 、迷 迭 香 酸 、紫 草 酸 、丹 酚 酸 B