微丝观察荧光探针标记.pptVIP

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2019-07-04 发布于广东
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微丝观察荧光探针标记.ppt

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实验十二微丝的观察（荧光探针标记）;一实验目的;二实验原理;三实验步骤;三实验步骤;注意事项： 1 荧光染料均存在淬灭问题，请尽量注意避光，以减缓荧光淬灭。 2 Phalloidin 有一定毒性(LD50 为2 mg/kg)，1ml Actin-Tracker Green中的phalloidin少于0.01mg，使用时请注意适当防护。 3为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。 4 固各步洗细胞要轻，勿使细胞脱落。 5 用1%Triton X—100 抽提杂蛋白要作预实验，抽提时间长将破坏细胞结构，抽提时间短背景干扰大。 6 鬼笔环肽标记微丝，染色时间勿太长，否则背景发红。在没有固定液3.7%甲醛—PEMD的情况下，也可以用-20℃冷甲醇代替，但是效果较差。 7 细胞充分贴壁铺展时应力纤维较多，形态挺直。反之，细胞收缩变圆，应力纤维弯曲，甚至部分解聚消失而显得稀少。 8每步洗涤要充分，并吸去水分(但也不要干透)，以免稀释下一步的抗体或试剂，这样才能得到清晰的荧光图像。 ; 四作业;五预期结果（共聚焦效果图）