豆科植物中转录因子n六sp1、nsp2和ipn2对结瘤起始基因调控的研究.docxVIP

分类号： 分类号： 密级：无 华中农业大学硕士学位论文 豆科植物中转录因子NSPI、NSP2和IPN2 对结瘤起始基因调控的研究 The regulation of the transcription factors NSPl，NSP2 and IPN2 on nodule inception in Legume 硕士研究生：高秀梅 学 号 ： 2012304110018 指导教师：张忠明教授 专业：微生物学 研究方向：共生固氮分子生物学 获得学位名称：理学硕士 获得学位时间：2015年6月 华中农业大学生命科学与技术学院 二零一五年六月 万方数据 学位论文独创性声明及使用授权书学位论文 学位论文独创性声明及使用授权书 学位论文 如需保密 年月 日 是否保密 龟 解密时间 测一嘲删 本人声明所呈交的论文是我个人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究 成果。尽我所知，除了文中特别加以标注和致谢的地方外，论文中不包含其他人已 经发表或撰写过的研究成果，也不包含为获得华中农业大学或其他教育机构的学位 或证书而使用过的材料，指导教师对此进行了审定。与我一同工作的同志对本研究 所做的任何贡献均已在论文中做了明确的说明，并表示了谢意。 研究生签名： 岛宽相 时间：矽lF 年6 月 f 日 学位论文使用授权书 学位论文作者签名：岛雹柄导师签名：猢 签名日期：2-oIF年6月 1日 签名日期：细心‘年6月f El 注：请将本表直接装订在学位论文的扉页和目录之间 万方数据 豆科植物中转录因子NSPI、NSP2和IPN2对结瘤起始基因调控的研究目录 豆科植物中转录因子NSPI、NSP2和IPN2对结瘤起始基因调控的研究 目录 摘要 ．．i Abstract．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．． ．．．．．．．．．．．．iii 缩略语表 ．v 1．前言 ．11 ．日U舌 ． 1 1．1共生固氮的意义 l 1．2根瘤菌侵染 l 1．3根瘤器官发生 3 1．4早期结瘤信号转导 4 1．5结瘤起始基因NIN． 6 1．6NIN相关的GRAS家族蛋白和MYB家族蛋白 ．7 1．6．1 GRAS家族蛋白 一7 1．6．2 MYB家族蛋白 8 1．7植物原生质体 9 1．8双荧光素酶报告系统 一1 0 1．9研究的目的及意义 ．．． 一11 2材料与方法 12 2．1材料 ． ．12 2．1．1质粒和菌株 ．．12 2．1．2植物材料 ．．13 2．1-3克隆构建引物设计 14 2．1．4基本分子生物学操作方法 14 2．1．5主要培养基 ．．15 2．2方法 ．1 6 2．2．1荧光素酶表达载体的构建 16 2．2．2苜蓿Ⅳ妒J、NSP2、删和儿K自身启动子的构建 ．18 2．2．3苜蓿毛根转化和鉴定 ．．1 8 2．2．4烟草体内瞬时表达异源蛋白 21 万方数据 华中农业大学2015届硕士研究生学位论文2．2．5拟南芥原生质体分离与PEG转化 华中农业大学2015届硕士研究生学位论文 2．2．5拟南芥原生质体分离与PEG转化 ．24 2．2．6 Dual．Luciferase@报告基因检测 27 3．结果分析 ． 29 3．1苜蓿NSPl、NSP2、IPN2和ILK的研究 ．29 3．1．1苜蓿NSPl、NSP2、胆舵和ILK启动子表达载体的构建 ．．29 3．1．2苜蓿NSPl、NSP2、IPN2和ILK的组织定位分析 30 3．2百脉根转录因子NSPl、NSP2和IPN2对NIN的调控 3 1 3．2．1构建双荧光素酶表达载体 31 3．2．2质粒共转化烟草中的瞬时表达分析 32 3．2．3质粒共转化在拟南芥中的瞬时表达分析 34 4总结、讨论及展望 37 4．1总结 ．．37 4．2讨论 ．．38 4．3展望 ．．39 致{射 50 11 万方数据 豆科植物中转录因子NSPl、NSP2和IPN2对结瘤起始基因调控的研究摘要 豆科植物中转录因子NSPl、NSP2和IPN2对结瘤起始基因调控的研究 摘要 豆科植物根系释放的酚类黄酮化合物进入根际，激活根瘤菌结瘤基因的表达， 导致产生和分泌结瘤因子(NF)。结瘤因子是根瘤菌与豆科植物相互识别的关键信号 分子，在共生信号途径中有重要作用。对典型的模式豆科植物苜蓿和百脉根根瘤的 基因组分析表明，信号途径是结瘤信号转导所必须的。研究表明，两个GRAS家族 转录调节因子一结瘤信号通道蛋白(NSPl)和NSP2，一起参与CCaMK下游共生 固氮途径的调控。在体外，NSPl可直接与早期结瘤素基因ENODl