地衣芽孢杆菌cp-16与是嗜麦芽窄食单胞菌10号菌降解角蛋白关键酶研究.docxVIP

Secrecy： Secrecy： No． Chinese Academy of Agricultural Sciences Dissertation The Key Hydrolysis Enzymes of Keratin in B．1icheniformisCP·16 and S．maltophilia 10 M．S．Candidate：Zou Linyuan 一 ■，’_，’一 Supervlsor： ／_zlang lieymlg 一 一 Maj or：Animal Nutrition and Feed Science Specialty：Enzyme and Antinutritional Factor May 2015 万方数据 IIIIIIIIIIlll IIIIIIIIIIlllLIIIqIllIllIllhillIIl Y278751 7 独创性声明 本人声明所呈交的论文是我个人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成 果。尽我所知，除了文中特别加以标注和致谢的地方外，论文中不包含其他入已经发 表或撰写过的研究成果，也不包含为获得中国农业科学院或其它教育机构的学位或证 书而使用过的材料。与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均已在论文中作了 明确的说明并表示了谢意。 研究生签名j豸’林褫， 时间： 扣涉年‘月／日 关于论文使用授权的声明 本人完全了解中国农业科学院有关保留、使用学位论文的规定，即：中国农业科 学院有权保留送交论文的复印件和磁盘，允许论文被查阅和借阅，可以采用影印、缩 印或扫描等复制手段保存、汇编学位论文。同意中国农业科学院可以用不同方式在不 同媒体上发表、传播学位论文的全部或部分内容。 研．究生签名：豸p林晒， 时间： 了秒年，月／日 导师签名： 弓券乞叩易 啦阃：b ff-每占R，B 万方数据 中国农业科学院 中国农业科学院 硕士学位论文评阅人、答辩委员会签名表 论文题目 地衣芽孢杆菌CP．16与嗜麦芽窄食单胞菌10号胬降解角蛋白关键酶研究 动物营养与 论文作者 邹林源 专 业 研究方向 酶与抗营养因予 饲料科学 指导教师 张铁鹰 培养单位(研究所) 北京畜牧兽医研究所 硕(博) 姓名 职称 单 位 专 业 签名 导师 评 王军军 教授 硕导口 中国农业大学 动物营养与 ＼＼ 博导口 饲料科学 阅 硕导口 动物营养与 ＼＼ 人 曹云鹤 副教授 博导函 中睡农业大学 饲料科学 答 辩 硕导口 动物营养与 阳哆 砻‘ 呙于明 教授 溥导∥ 中国农业大学 饲料科学 席 陆建中 研究员 硕导口 中国农业科学院 信息管理 修酣 蹲导影 硕导口 动物营养与 辩 蔡辉益 研究员 硕导口 中国农业科学院 动物营养与 撇 =旌 计成 教授 中国农业大学 刁武 瑚 博导留 饲料科学 搏导酉 饲料研究所 饲料科学／ 硕导口 北京市农林科学院 委 刘爵 研究员 博导∥ 裔牧兽医研究所 动物医学 训蕲 状 王润莲 教授 硕导口 广东海洋大学 动物营养与 方晌也 蹲导醇 饲料科学 曹云鹤 副教授 硕导口 动物营养与 秘 博导1∥ 中国农q址大学 饲料科学 会议记录(秘书) 梁争文 论文答辩时间地点 2015．5．22 9：00 am北京畜牧兽医研究所科研楼二二楼东侧会议室 万方数据 摘要羽毛主要为角蛋白，且富含二硫键，较其他类型蛋白质更为稳定。动物消化道内蛋白酶并不 摘要 羽毛主要为角蛋白，且富含二硫键，较其他类型蛋白质更为稳定。动物消化道内蛋白酶并不 能将其水解，限制了羽毛蛋白质在畜禽日粮中的应用。打开二硫键，破坏角蛋白空间结构，是提 高其利用率的关键。本实验以高二硫键还原能力角蛋白降解菌地衣芽孢杆菌(B．1icheniformis) CP．16和嗜麦芽窄食单胞菌(S．maltophilia)10号菌为实验材料，旨在获得具有高二硫键还原酶活 性的酶蛋白，并对其与角蛋白酶协同作用进行研究，探索生物酶解角蛋白的关键酶。 B．1ichenifoM括CP．16降解羽毛关键酶蛋白的分离纯化。在本实验室研究的基础上，利用离子 交换层析和分子筛层析分离纯化出了新的羽毛降解关键蛋白酶．寡肽酶。研究发现，其可促进角蛋 白酶水解酪蛋白的水解度，其主要在角蛋白水解后期发挥作用。 具二硫键还原能力酶蛋白基因的克隆表达。利用生物信息学技术，在Uniprot中搜集到了 B．1ichenifo，．m妇和S．maltophilia中有关二硫键还原的五个酶蛋白核酸序列。根据该序列设计引物， 以B．1icheniformis CP．16和S．maltophilia 10号菌为实验材料成功扩增出目的基因，并在大肠杆菌中 成功表达纯化，分别命名为B．P、S—G、S—T、S．P和S．A。 具二硫键还原能力重组酶酶学性质及与角蛋白酶水解角蛋白相互关