蛋白质的沉淀化学反应.pptVIP

实验一 蛋白质的沉淀反应 原 理 在水溶液中的蛋白质分子由于表面生成水化层和同性电荷层而成为稳定的亲水胶体颗粒，在一定的理化因素影响下，蛋白质颗粒可因失去电荷和脱水而沉淀。蛋白质的沉淀反应可分为以下两类： 1．可逆的沉淀反应：此时蛋白质分子的结构尚未发生显著变化，除去引起沉淀的因素后，蛋白质的沉淀仍然能溶解于原来的溶剂中，并保持其天然性质而不变性，如大多数蛋白质的盐析作用或在低温下用乙醇(或丙酮)短时间作用于蛋白质。提纯蛋白质时，常利用此类反应。 无机盐(硫酸铵、硫酸钠、氯化钠等)的浓溶液能析出蛋白质。盐的浓度不同，析出的蛋白质也不同，如球蛋白可在半饱和硫酸铵溶液中析出。而清蛋白则在饱和硫酸铵溶液中才能析出。由盐析获得的蛋白质沉淀，当降低其盐类浓度时又能再溶解，故蛋白质的盐析作用是可逆过程。 2．不可逆的沉淀反应：此时蛋白质分子内部结构发生重大改变，蛋白质常变性而沉淀，不再溶于原来的溶剂中。加热引起的蛋白质沉淀与凝固，蛋白质与重金属离子或某些有机酸的反应都属于此类。 蛋白质变性后，有时由于维持溶液稳定的条件仍然存在(如电荷)，并不析出。因此，变性蛋白质并不一定都表现为沉淀，而沉淀的蛋白质也未必都已变性。 1．蛋白质的盐析：取锥形瓶一个，加入5％卵清蛋白溶液5.0ml，再加等量的饱和硫酸铵溶液，混匀后静置数分钟则析出球蛋白的沉淀。转移至离心管，2000r／min离心5min。小心将上清转移至小烧杯；向沉淀中加少量水，观察是否溶解，为什么? 向小烧杯中上清液添加硫酸铵粉末，边加边摇，直至不再溶解为止，此时析出的沉淀为清蛋白。转移至离心管，2000r／min离心5min。弃上清，向清蛋白沉淀中加少量蒸馏水，观察沉淀的再溶解。 操 作 2．重金属离子沉淀蛋白质：取1支试管，加入蛋白质溶液1ml，再加入3％硝酸银溶液2滴。振荡试管，有沉淀产生。放置片刻，取出少量沉淀，向沉淀中加入少量水，沉淀是否溶解，为什么? 3．某些有机物沉淀蛋白质：取1支试管，加入蛋白质溶液1ml，加入5％三氯乙酸溶液3～5滴，振荡试管，观察沉淀的生成。放置片刻，取出少量沉淀，向沉淀中加入少量的水，观察沉淀是否溶解。 4．有机溶剂沉淀蛋白质：取1支试管，加入蛋白质溶液1ml，再加入1ml95％乙醇混匀，观察沉淀的生成。 5．乙醇引起的变性与沉淀：取3支试管，依下表顺序加入试剂。 振荡混匀后，观察有何变化。放置片刻，向第1管内加水8ml。然后在第2、3号管中各加1滴甲基红，再分别用0.1mol/L醋酸溶液及0.05mol/L碳酸钠溶液中和之。观察各管颜色的变化和沉淀的生成。每管各取少量沉淀，再加0.1mol/L盐酸溶液数10滴，观察沉淀的再溶解，解释各管发生的全部现象。