试验二血清总蛋白测定双缩脲法.docVIP

实验二 血清总蛋白测定 （双缩脲法） 血清总蛋白是血清中所有蛋白质的总称，正常人含量为60-80g/L。按不同的分离方法可将血清蛋白质分为不同的组分。从目前临床生化实际应用上，血清总蛋白分为清蛋白和球蛋白两大类，其中球蛋白又分为α1球蛋白、α2球蛋白、β球蛋白、γ球蛋白四种。正常成人每天所合成的血清蛋白质中，清蛋白及大部分α1、α2、β球蛋白是肝脏合成的，γ球蛋白（大部分是免疫球蛋白）则主要来源与浆细胞。 总蛋白测定，一般利用下列四种蛋白质的结构或性质进行：重复的肽键结构；酪氨酸和色氨酸残基对酚试剂反应或紫外吸收；与染料的结合能力；沉淀后借浊度或光折射测定。目前临床应用最广泛的方法是利用蛋白质分子中的多个肽键与双缩脲试剂显色法。 【目的】 1. 熟悉血清总蛋白测定的原理及基本操作。 2. 掌握血清总蛋白测定的临床意义。 【原理】 蛋白质分子中的肽键（-CONH-）在碱性条件下能与Cu2+ 作用形成紫红色络合物。此呈色反应与双缩脲（H2N-OC-NH-CO-NH2）在碱性溶液中与Cu2+ 作用产生紫红色的反应相似，故称为双缩脲反应。反应中溶液颜色的深浅与蛋白质的含量成正比，可用分光光度法定量检测蛋白质的含量。 凡具有两个以上肽键结构的化合物均有此反应，因此双缩脲反应广泛用于肽及蛋白质定性、定量检测。 【器材】 恒温水浴箱、分光光度计、刻度吸管、微量移液管、试管、试管架。 【试