第六章胚胎培养课件.pptVIP

第六章 胚胎培养和离体受精 第一节 离体胚培养 合子胚指的是由雌雄配子融合形成的合子继而发育成的胚。对合子胚进行离体培养的主要目的是获得能正常生长发育的植株。 植物的胚发育一般是从受精以后的合子开始的。胚的组成除了由合子发育的胚以外，其整个子房都属于胚的范畴。根据在培养中所取的外植体的部位不同，植物胚培养包括胚培养、胚珠培养、子房培养和胚乳培养。 一、植物胚培养(一)胚培养的应用和类型1．胚培养的应用（1）克服远缘杂交不亲和性  远缘杂交中，由于胚乳发育不正常或杂种胚与胚乳之间生理上的不协调，造成杂种胚早期夭折。将早期幼胚进行离体培养，可克服这种受精后障碍，产生远缘杂种。 (2)打破种子休眠，缩短育种周期  许多植物的种子发育不完全或有抑制物存在而影响种胚发芽，如一些无胚乳种子(如兰科)蒴果成熟时，胚龄幼小，需与微生物“共生发芽”。银杏种子脱离母体后，胚龄幼小，仍继续吸收胚乳营养，4～5个月后才能成为成熟胚。通过幼胚培养，可促使这些植物的幼胚达到生理和形态上的成熟而提早萌发，形成植株。 (3)提高种子萌发率  长期营养繁殖的植物具有形成种子的能力，但其生活力较低，萌发成苗率低下，胚培养可促进这类种子萌发和形成幼苗。如芭蕉属有许多结实的品种，自然情况下胚不能萌发，如果取出胚，在简单的无机盐培养基中就能很快使其萌发形成幼苗。 二．幼胚培养Laibach在1925—1929年间，通过培养亚麻种间杂种幼胚，成功地获得了种间杂种，首次证实了这种方法在实际应用中的价值。他指出，在所有不能形成有生活力种子的杂交中，均可以采用幼胚培养产生杂种。李继侗1933年在银杏培养中发现胚乳提取物能够促进银杏离体胚的生长。这一发现为后人使用植物胚乳汁液、幼嫩种子及果实提取液等天然物质促进培养物生长提供了重要的启示和参考。 2.幼胚剥离  胚是一个植株的另一种形态，因此胚剥离的成功与否是幼胚培养能否成功的键。对于大多数植物的幼胚剥离来讲均要借助解剖镜，特别是那些种子较小的植物更是如此。  另外，幼胚是一种半透明、高黏稠状组织，剥离过程中极易失水干缩，因此，在剥离时一定要注意保湿，且操作要迅速。 3.接种培养  剥离出来的幼胚要立即接种到培养基上进行培养。胚培养相对于其它培养来讲要容易一些，但是，在培养之前必须对所培养的对象在自然发育条件下的特性充分了解。如胚的休眠问题，是否需要春化作用，胚萌发的温度等，这些对提高胚培养的成功率均有重要影响。 幼胚离体培养的生长发育方式（有3种)①胚性发育： 幼胚接种到培养基上以后，仍然按照在活体内的发育方式发育，最后形成成熟胚(有时甚至可能类似种子)，然后再按种子萌发途径出苗形成完整植株。这种途径发育的幼胚，一般一个幼胚将来就是一个植株。 ②早熟萌发： 幼胚接种后，离体胚不继续其胚性生长，而是在培养基上迅速萌发成幼苗，通常称之为早熟萌发。在大多数情况下，一个幼胚萌发成一个植株，但有时会由于细胞分裂产生大量的胚性细胞，以后形成许多胚状体，从而可以形成许多植株，这种现象就是所谓的丛生胚现象。 ③愈伤组织： 在许多情况下，幼胚在离体培养中首先发生细胞增殖，形成愈伤组织。一般来讲由胚形成的愈伤组织大多为胚性愈伤组织，这种胚性愈伤组织很容易分化形成植株。此外，通过胚培养获得的这种胚性愈伤组织亦是很好的遗传受体和分离原生质体的来源。 4.幼胚培养条件(1)培养基 成熟胚对培养条件的要求一般不是很高，甚至在含有基本培养基成分的培养基中即可生长。但未成熟幼胚对培养基的要求则较严格，不仅必须有完全的营养成分，而且对培养基的渗透压、激素水平及附加成分均有一定的要求，其中影响较大的有蔗糖浓度、激素种类、激素配比和附加成分等。 (2)光照 幼胚培养，培养初期的黑暗条件是必要的。黑暗培养的时间与胚的发育时期有关，越是处于发育早期的胚，需要黑暗培养的时间就越长。大多数处于球形期至心形期的幼胚，需要在黑暗条件下培养两周后再给予光照。对于大多数植物来讲，离体幼胚培养已经启动发育以后，给予和其自然光周期一致的光照条件有利于幼胚发育。 (3)温度 幼胚培养的温度一般以该植物种子萌发的适宜温度为好。有些植物的幼胚培养在给予适宜温度之前要求一定的低温处理。如桃的幼胚培养需要在2～4℃条件下处理40～60天，然后再转入25℃条件下培养。 第二节 胚乳培养 胚乳是一种性质独特的组织。在大多数显花植物中，胚乳是由3个单倍体核融合而成的，其中1个单倍体核来自雄配子体，2个来自雌配子体，因此，（被子植物）胚乳是三倍体组织。对胚来说，胚乳是主要的营养组织，能在很大程度