DNA合成及组装幻灯片.pptx

DNA的合成与组装;目录;为什么我们需要合成DNA？;结论： 寡核苷酸链合成费用趋于稳定。目前尚无技术革新导致的合成能力飞跃。 基因合成费用稳步下降。虽然作为原料的寡核苷酸链价格无明显变化，但由于DNA组装方法的更新使得可以用更少量的寡核苷酸链合成更多更长的基因。;合成及组装DNA的策略;化学合成-固相亚磷酰胺三酯法;步骤;准确率;纯化方式简介;引物合成价格与纯化方式;通过寡核苷酸链构建基因——连接法;通过寡核苷酸链构建基因——PCR法;连接法与PCR法的比较;传统克隆方法;将目标片段和载体使用同一种限制性内切酶酶切，回收酶切后的目的片段使用DNA连接酶连接。;传统方法的优缺点：;BioBrick 元件的标准化;BioBrick 元件的标准化;BioBrick 流程图;BioBrick方法的优缺点;Gateway组装;多片段组装;Gateway组装方法优缺点;Gibson等温一步法;Gibson流程图;使用Gibson方法快速组装基因回路;Gibson组装的优缺点;Golden gate;Golden gate快速组装回路;多种元件混合组装;Golden gate的优缺点;小结