环境微生物学 教学课件 ppt 作者 殷士学 第6章.pptVIP

(1) 致育质粒　 大肠杆菌的F致育因子是首先发现的一种质粒，它控制着大肠杆菌性丝的形成，长约6×104bp,约占大肠杆菌染色体的2%，是一种环形DNA分子，主要由三个区段组成：复制控制区如不相容性基因inc及复制起始区oriS；转移操纵子如tra；重组控制区(见图6-11)。  (2) 抗性质粒抗性质粒决定着宿主对一种或几种抗生素、金属或其他药物表现出抗性。 研究得最清楚的一类抗性质粒是细菌的R质粒。R质粒可带有多种抗生素基因，这些基因一般均编码蛋白，这些蛋白有的可使抗生素失活，有的影响其进入细胞。R质粒主要由与F质粒的tra操纵子相似的抗性转移因子(RTF)和抗性决定因子两部分组成。前者包括质粒的复制和转移基因，后者可含多种抗生素的抗性基因，其本身不能移动，只有在 RTF的推动下才能转移。因R因子对多种抗生素有抗性，故可用作菌株筛选的标记。 (3) 细菌素质粒细菌素是细菌产生的一种能够抑制或杀死密切相关种群或者同一种的不同菌株的特殊物质。 目前研究得最深入的是大肠杆菌产生的大肠菌素，它是由Col质粒决定的。细菌素能与敏感细菌细胞壁上的专一性受体蛋白相结合，进而抑制或杀死敏感细菌。Col质粒有些具有接合性有些不具接合性。 (4) 降解质粒这是具有分解多种特殊有机化合物能力的因子。 降解质粒主要存在于假单孢菌中，这些质粒以分解的底物命名，包括CAM(樟脑)、OCT(辛烷)、XYL(二甲苯)SAL(水杨酸)、MDL(扁桃酸)、NAP(萘)、TOL(甲苯)等。降解质粒在自然界物质循环、环境保护和污染环境的治理方面有着重要的应用前景。 (5) 毒性质粒这是一种携带编码产生毒素基因的质粒。 如大肠杆菌可侵入小肠产生一种毒素导致腹泻，其细胞表面有一种蛋白，称为入侵因子抗原(CFA)，它是由质粒编码的。这一蛋白可保证细菌细胞吸附到肠上皮细胞。已知的各种细菌的毒素因子大部分由质粒编码，也有的由可遗传因子或噬菌体编码。 6.2.4　接合 1.接合现象的确定2.接合的机制3. F因子 4. Hfr菌株5. F′因子 1.接合现象的确定 相当长的一段时间人们认为细菌是无性繁殖，各细菌横向没有遗传物质的交换和重组，但后来一些现象证明这一观点并不正确。Lederberg和Tatum于1946年首先发现了接合现象。他们筛选出两种不同大肠杆菌营养缺陷型突变株，一株是需要蛋氨酸(met-)、生物素(bio-)，另一株需要苏氨酸(thr-)、亮氨酸(leu-)，将它们分别涂布在基本培养基上，这两个亲本菌株均不能生长，但将它们在完全培养基上混合培养后再涂布于基本培养基上却可以生长。这说明这两个营养缺陷型突变株之间进行了基因重组，在基本培养基上形成了met+、bio+、thr+、leu+的菌落。由于采用双重营养缺陷菌株，回复突变的可能性被排除，进一步的实验排除了上述结果是细菌转化作用的可能性，说明确实存在着由细胞直接接触而引起的基因重组的接合现象。 2.接合的机制 图6-12　质粒DNA的接合作用a)质粒通过性纤毛结合过程　b)质粒DNA切口 3. F因子 F因子又称F质粒，大肠杆菌的F质粒不仅具接合性，还能整合到染色体中去带动染色体转移，此时的F质粒便成为附加体。带有游离状态的F质粒的细胞成为F+，作为F+受体细胞中没有F质粒 4. Hfr菌株  图6-13　不同Hfr菌株的形成方式a)染色体上可供整后下质粒的特异位点b)整合后形成四种包含不同插入片段的Hfr细胞染色体注：由于F质粒有4个整合位点，能形成Hfr1、Hfr2、Hfr3、Hfr4四种不同的Hfr细胞。 5. F′因子 整合后的F因子有时可从染色体上脱落，但脱落时有时会发生错误切割，从而形成携带部分细菌染色体基因的质粒，这种质粒称为F′因子。当F′因子与F-细胞接合时，若F′因子上携带的细菌基因与F-细胞的染色体存在着同源性，则可发生很高频率的同源重组。 6.3　体外遗传学技术 6.3.1　限制酶6.3.2　DNA的测序及合成6.3.3　分子克隆6.3.4　载体6.3.5　DNA扩增6.3.6　体外定点诱变 6.3.1　限制酶 1.寄主的限制和修饰现象2.核酸内切限制酶的类型 1.寄主的限制和修饰现象 细菌的限制和修饰体系能够辨别自己的DNA和外来的DNA，并通过限制酶的作用破坏外来DNA使其迅速降解，而寄主本身的DNA由于在合成后通过甲基化酶得以甲基化，使DNA得到修饰，从而免遭自身限制酶的破坏。因此，由于限制和修饰体系的存在，使得生长在某一菌株上的噬菌体侵染其他菌株的能力远远不如侵染原菌株的能力。根据限制-修饰现象发现的核酸内切限制酶，现已成为重组DNA技术的重要工具酶。 2.核酸内切限制酶的类型 1) Ⅰ型核酸内切限制酶都是多聚蛋白体，具有切割DNA的功能。