基于抗原抗体反应持牛源A型多杀性巴氏杆菌保护性抗原的筛选及鉴定-微生物学专业论文.docxVIP

Dissertation Dissertation for Master Degree of SouthwestUniversity Screeing and Identification of Protective Antigens from Bovine Pasteurella multocida serotype A based on antigen—·antibody Reaction C andidate：Li Chunming Directed by：Prof．Peng Yuanyi Maj or：Microbiology Field：Microbial metabolism and regulation ChongqingChina May,2015 万方数据 独创性声明学位论文题目：基王拉厦擅签区廑鲍生塑△型垒苤!眭巴医盘菌堡塑性 独创性声明 学位论文题目：基王拉厦擅签区廑鲍生塑△型垒苤!眭巴医盘菌堡塑性 揎厦的篮选区鉴定 本人提交的学位论文是在导师指导下进行的研究工作及取得的研 究成果。论文中引用他人已经发表或出版过的研究成果，文中已加了 特别标注。对本研究及学位论文撰写曾做出贡献的老师、朋友、同仁 在文中作了明确说明并表示衷心感谢。 学位论文作者： 签字日期：矽∥年∥月17．-EI 学位论文版权使用授权书 本学位论文作者完全了解西南大学有关保留、使用学位论文的规 定，有权保留并向国家有关部门或机构送交论文的复印件和磁盘，允 许论文被查阅和借阅。本人授权西南大学研究生院(筹)可以将学位论 文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索，可以采用影印、缩印 或扫描等复制手段保存、汇编学位论文。 (保密的学位论文在解密后适用本授权书，本论文：耐不保密，口 保密期限至年月止)。学位论文作者签名：劂 导师签名： 签字日期：力形年∥月／2日 签字日期： ／易日 万方数据 目 目 录 摘要 ．．I ABSTRACT．．．．． ． ．．．．．．．．．．． ．．．．．．．．． ． ． ． ． ． ． ． ．．．．．．．．．．．．．． ． ． ．．． ．III 第1章文献综述 ．1 1．1巴氏杆菌病的病原学 1 1．1．1多杀性巴氏杆菌的概述 1 1．1．2多杀性巴氏杆菌的病原特征 1 1．1．3多杀性巴氏杆菌的血清型 2 1．2多杀性巴氏杆菌病流行现状 2 1．3多杀性巴氏杆菌病诊断与检测方法 2 1．4多杀性巴氏杆菌病的防治 3 1．5多杀性巴氏杆菌致病性及保护性抗原研究 3 1．5．1 IV型菌毛和粘附素 ．．4 1．5．2荚膜 4 1．5．3脂多糖 5 1．5．4外膜蛋白 5 1．5．5多杀性巴氏杆菌毒素 6 1．5．6其他毒力因子 6 1．6筛选疫苗靶基因的方法 7 1．6．1基因组学技术 7 1．6．2蛋白质组学技术 7 1．6．3生物芯片技术 8 第2章引言 ．9 2．1研究目的与意义 9 2．2研究内容 9 2．2．1牛源多杀性巴氏杆菌保护性抗原候选基因的初步筛选及克隆表达 9 2．2．2牛源巴氏杆菌保护性抗原候选分子的间接ELISA方法筛选 10 2．2．3部分保护性抗原候选分子对小鼠的免疫保护性研究 ．10 2．3技术路线 ．．1 0 第3章牛源多杀性巴氏杆菌保护性抗原的初步筛选及克隆表达 11 3．1材料 ．11 万方数据 3．1．1菌株与培养基 3．1．1菌株与培养基 ．11 3．1．2试剂盒 11 3．1．3主要试剂 ． 11 3．1．4主要仪器及设备 ．11 3．1．5主要试剂的配置 ．12 3．2方法 ．13 3．2．1牛源A型多杀性巴氏杆菌候选基因的克隆 13 3．2．2牛源A型多杀性巴氏杆菌候选基因重组载体的构建 14 3．2．3牛源A型多杀性巴氏杆菌候选基因的表达 18 3．3结果 ．19 313．1生物信息学分析结果 ．19 3．3．2特异性引物设计结果 ．20 3．3．3目的基因PCR结果 23 3．3．4目的蛋白的诱导表达 ．25 3．4讨论 ．27 3．4．1基于基因组学技术的初步筛选 ．27 3．4．2引物的设计注意事项 ．27 3．4．3载体的选择与构建 ．28 3．4．4大肠杆菌表达系统诱导时间的优化 ．28 第4章牛源巴氏杆菌保护性抗原候选分子的间接ELISA方法筛选 ．31 4．1材料 ．31 4．1．1主要试剂 ．3 1 4．1．2主要仪器和设备 ．31 4．1．3主要试剂的配置 ．32 4．2方法 ．33 4．2．1不同血清型牛源多杀性巴氏杆菌抗血清的制备及效价测定 ．33 4．2．2保护性抗原候选分子的大量诱导表达、纯化、复性及鉴定 ．34 4．2．3保护性抗原候选分子的间接ELISA方法筛选 35 4．3结果 ．35 4