酶的专一性及影响酶促反应的因素.docVIP

实验二 酶的专一性及影响酶促反应的因素 一 实验目的 通过本实验，证明酶对底物催化的专一性，以及PH、温度、激活剂、抵制剂对酶促反应速度的影响。 二 实验原理 唾液淀粉酶能专一的催化淀粉水解，生成一系列水解产物，即糊精、麦芽糖、葡萄糖等。麦芽糖或葡萄糖都属于还原糖，能使班氏试剂中的二价铜离子还原成亚铜，并生成砖红色的氧化亚铜。淀粉酶不能催化蔗糖水解，且蔗糖本身不是还原糖，所以不能与班氏试剂作用呈色。以此证明酶催化底物的专一性。 淀粉或淀粉的水解产物遇碘会呈现不同的颜色，淀粉遇碘变蓝色；糊精遇碘则根据其分子量的大小依次呈现紫色、褐色、红色；而麦芽糖、葡萄糖遇碘不呈色。通过颜色变化可以了解淀粉的程度，以观察PH、温度激活剂、抑制剂对酶促反应速度的影响。 三 药品器材 试管、试管夹、样品杯、滴瓶、温度计、恒温水浴箱，冰箱等。 1.1%淀粉溶液 称取可溶性淀粉1g，加5ml蒸馏水调成糊状，徐徐倒入80ml煮沸的蒸馏水中，不断搅拌，待其溶解后，加蒸馏水至100ml。此液应新鲜配制，防止细菌污染。 2．1%蔗糖溶液 称1g蔗糖，加蒸馏水至100ml溶解。 3．PH6.8缓冲液 取0.2mol/L磷酸氢二钠溶液154.5ml，0.1mol/L柠檬酸溶液45.5ml混合即可。 4．PH4.8缓冲液 取0.2mol/L磷酸氢二钠溶液98.6ml，0.1mol/L柠檬酸溶液101