基因工程概论.doc

基 因 工 程 概 论 张惠展 编 著 华东理工大学出版社 1999 前 言 世界的丰富多彩是因为生命的存在，而生命诞生、发育、生长、病变、衰老乃至死亡的整个过程均由基因控制。DNA或RNA链上碱基的线性排列顺序编码着生命运动的时空四维信息，甚至就连高等哺乳动物和人类的思维与智商亦与基因有关。因此，目前人类正在努力实施规模宏伟的基因组研究计划，期望由此认识生命，改造生命，优化生命。 严格地讲，基因工程是获取、整理、破译、编辑和表达生物体遗传信息（基因）的一种操作平台与技术，它以细胞生物学、分子生物学和分子遗传学的基本理论体系为指导，在基因的分离克隆、基因表达调控机制的诠释、基因编码产物的产业化、生物遗传性状的改良乃至基因治疗等方面日益显示出极高的实用价值。作为二十世纪生命科学最辉煌的成就，诞生于七十年代初的基因工程技术正在驱动着人类社会生活方式的重大变革。 早在1985年，华东理工大学就已为其生物化学和生化工程专业的本科生开设了“基因工程概论”的专业选修课。然而长期以来，国内出版的有关基因工程方面的书籍相当一部分属于译著，而且偏重于分子克隆的技术和实验操作程序，在基因工程的基本原理、应用策略及设计思路方面尤显不足，而后者恰恰是高等院校专业教科书所必需的要素。本书形成的动机就是试图弥补这些缺陷。为达到此目的，本书从基因的表达调控机制入手，将DNA重组技术归纳为切、接、转、增、检五大基本操作单元，进而按照受体细胞的生物学分类，逐一展开各系统基因工程的原理与应用。其中，重点论述基因工程技术应用的策略与思路，以及力求以图解的方式取代繁琐的文字叙述，是本书撰写的两大特色。 本书所涉及的基本理论部分主要参照了十多年来不断充实的教学讲义和《GENE V》（Benjamin Lewin著，1994出版）；应用战略部分来自《Molecular Biotechonology》（Bernard R.Glick和Jack J.Pasternak著，1994出版）及近年来发表的相关综述；实验技术部分则由《Recombinant DNA》（James D.Watson、Michael Gilman、Jan Witkowski和Mark Zoller著，1992出版）、《Molecular Cloning》（J.Sambrook、E.F.Fritsch和T.Maniatis著，1989出版）以及著者长期积累的经验体会组成。本书适用于作为生命科学各专业本科生和研究生的课程教材，同时也可作为有关工程技术人员的参考书。 本书初稿由叶江和赵艳霞输入电脑，姚峰和孙丽萍帮助收集了部分资料，叶江和张安还为全书制作了所有图表，孙玉琨教授对书稿撰写提出了许多宝贵建议，著者在此对他们表示衷心的感谢。 真诚欢迎专家和读者对本书提出宝贵意见。 著者 一九九九年四月二日初稿于姑苏城外 一九九九年八月二十日改毕于黄埔江畔 目 录 1 概述 1.1 基因工程的基本概念 1.2 基因工程的发展历史 1.3 基因工程研究的意义 2 基因的表达调控原理 2.1 启动子调控模型 2.2 操纵子调控模型 2.3 感受应答调控模型 2.4 RNA结构调控模型 2.5 RNA剪切编辑调控模型 3 DNA重组克隆的单元操作 3.1 DNA重组的载体 3.2 DNA的体外重组（切与接） 3.3 重组DNA分子的转化与扩增（转与增） 3.4 转化子的筛选与重组子的鉴定（检） 3.5 目的基因的克隆 4 大肠杆菌基因工程的原理与应用 4.1 外源基因在大肠杆菌中的高效表达原理 4.2 大肠杆菌工程菌的构建策略 4.3 重组异源蛋白的体外复性活化 4.4 大肠杆菌工程菌培养的最优化控制 4.5 基因工程菌的遗传不稳定性及其对策 4.6 利用重组大肠杆菌生产医用蛋白或多肽 5 非大肠杆菌的微生物基因工程 5.1 芽孢杆菌的重组表达系统 5.2 棒状杆菌的重组表达系统 5.3 链霉菌的基因工程 5.4 丝状真菌的基因工程 5.5 酵母菌的基因工程 5.6 其他具有重大经济价值的微生物基因工程 6 高等动物基因工程 6.1 动物转基因技术的基本概念 6.2 转基因导入动物体内的方法 6.3 利用动物转基因技术研究基因的表达与功能 6.4 利用转基因动物或细胞生产生物大分子 6.5 转基因技术在动物遗传性状改良中的应用 6.6 基因治疗 7 高等植物基因工程 7.1 高等植物的遗传学特性 7.2 高等植物的载体转化系统 7.3 利用植物转基因技术研究基因的表达与调控 7.4 利用转基因植物生产重组异源蛋白 7.5 转基因技术在植物品种改良中的应用 8 第二代基因工程 8.1 蛋白质工程的基本概念 8.2 基因的定向突