巨噬细胞吞噬.ppt

实验十一、 小鼠腹腔巨噬细胞吞噬活动的观察 『目的要求』 1、熟悉并理解细胞吞噬活动的生理过程 2、掌握诱导产生小鼠腹腔巨噬细胞的方法 『实验用品』 光学显微镜、2ml注射器、载玻片、盖玻片、解剖器械、1％鸡红细胞液、小白鼠、6％淀粉肉汤(含台盼蓝)、生理盐水 试剂的配制： 6％淀粉肉汤：称取牛肉膏0.3g、蛋白胨1.0g、氯化钠O.5g和台盼蓝(trypan blue)0.3g分别加入到100ml蒸馏水中溶解，再加入可溶性淀粉6g，混匀后煮沸灭菌，置4℃保存，使用时温浴溶解。 『实验原理』 高等动物体内存在着具有防疫功能的吞噬细胞系统，它由粒细胞和单核细胞等白细胞构成，是机体免疫系统的重要组成部分。巨噬细胞是体内的一种重要的免疫细胞，具有非特异性吞噬功能，当机体受到细菌等病原体及其它异物侵入时，巨噬细胞将向病原体或异物游走，当接触异物时，伸出伪足将其包围并进行内吞作用，将病原体或异物吞入细胞，形成吞噬泡，进而初级溶酶体与吞噬泡发生融合，将异物消化分解掉。本实验将观察到小鼠巨噬细胞对进入其体内的鸡血红细胞进行吞噬的情况。 单核巨噬细胞 『实验内容和方法』 (一)标本制备 1、在实验前一天，每只小鼠腹腔注射6％淀粉肉汤(含4％的台盼蓝)lml。 2、实验时每组取一只经上述处理的小鼠，腹腔注射1％的鸡红细胞悬液lml。然后轻揉小鼠腹部，使鸡红细胞分散。(腹腔注射时不要刺伤内脏) 3、20分钟后向腹腔注射0.5 ml生理盐水，轻揉小鼠腹部，使其腹腔液稀释。3分钟后用用颈椎脱臼法处死小鼠。 4、将小鼠置于解剖盘中或卫生纸上，剪开腹腔，把内脏推向一侧，用吸管或不装针头的注射器吸取腹腔液。 5、每人取一干净载玻片，滴一滴腹腔液，盖上盖玻片，标本便制备好了。 6、实验绘图。 (二)观察 巨噬细胞体积较大，呈圆形或不规则形，表面具有多个突起(伪足)，胞质中含有数量不等、大小不一的蓝色颗粒，它们是细胞吞噬含台盼蓝的淀粉肉汤后形成的吞噬体； 鸡红细胞呈椭圆形，淡黄色，具椭圆形的细胞核。 在视野中仔细寻找巨噬细胞吞噬鸡红细胞的不同阶段。有的鸡红细胞紧贴在巨噬细胞表面；有的红细胞已部分被吞入；有的巨噬细胞已吞入1个或多个红细胞，形成了吞噬泡。还可见有的吞噬泡体积已缩小并呈圆形，这说明该吞噬泡已与溶酶体发生融合，泡内的物质正在消化分解。 * * 腹腔注射 捉拿方法： 将小白鼠放在鼠笼盖铁网上，用右手持其尾巴向后拉，小鼠则会尽力向前蹬。用左手的拇指和食指抓住其头顶部皮肤，然后用左手小指与手掌之间夹住其尾巴。 给药方法： 小白鼠的给药途径有经口给药、腹腔内注射、尾静脉注射、皮下注射、皮内注射和肌肉注射等。我们常用的是腹腔注射。具体方法是：左手捉住小鼠(如前所述)，在其腹正中线稍外侧(避开膀胱和血管)用酒精消毒后，首先将注射针头向头部方向刺入皮下，进针1～2mm后，再以45°角刺穿腹部肌肉而进入腹腔(刺穿腹肌时有一落空感)。针头刺入腹腔后切勿左右摆动，以免损伤肠管或肝脏。注意每次注入的液体量应为0.1～0.2ml／10克体重。 *