DNA的复制与重组课程.pptVIP

* 转染是转化的一种特殊形式，用于原核细胞时其外源DNA是特指离体的噬菌体DNA，来感染感受态的细菌，并在其中得到表达。用于真核细胞时，对任何裸露DNA的吸收都称为转染。 * * 大肠杆菌F质粒（F因子）是研究得最多，也是研究得最清楚的一种接合质粒。 * * 最早研究清楚的特意位点重组系统是λ噬菌体DNA在宿主染色体上的整合与切除。λ噬菌体DNA能通过重组作用整合进Ecoli染色体的特异位点，称为前病毒或称前噬菌体。 * * * 转座酶识别IR(inverted repeat),与之结合. 在Tn中,有功能的IS可以转移其本身或内部基因. 当两端IS组件(module)相同时,转移可由任意一个完成( Tn903). 当两端不相同时.其功能可能有差异(Tn10,2.5%差异,左IS无功能). Tn的整体转座多于其两端的IS主要是对抗性基因的选择的结果. Mu转座酶-TnpA; 解离酶-TnpR;拆分点-Res site 中间平板上长出的原养型菌落 是两菌株之间发生了遗传交换 和重组所致！ 为了减少所培养的结果是回复突变的机会，采用了双重或三重营养缺陷型。该实验是建立在不大可能同时发生两种或三种回复突变的设想上的。 证实接合过程需要细胞间的直接接触的 “U”型管实验（ Bernard Davis，1950 ） 大肠杆菌的接合型与接合 F＋菌株 第三节 位点特异性重组 一、定义： 不依赖于DNA顺序的同源性，而依赖于能与某些酶相结 合的特异的DNA序列的存在。 二、噬菌体λ对E.coli DNA的整合 （一）λDNA存在两种形式 裂解状态 溶源状态 （二）通过位点特异性重组实现两种类型间的转换 λDNA整合到宿主DNA 进入溶源状态 λDNA从宿主DNA 中切离 进入裂解状态 （三）催化重组的酶 1、整合酶 Int (integrase)：有拓扑异构酶活性 2、整合宿主因子（IHF，integration host factor ） 3、切除酶（excisionase）/ 终止重组 （四）重组位点： 附着位点（attachment site） attP（ POP’）和attB（ BOB’）有15bp核心序列配对 （五）重组过程： 1、整合： POP’ + BOB’ →BOP’—POB 2、切离：BOP’—POB’ → POP’ + BOB’ attP attB attP attB 第四节 DNA的转座 一、转座子（transposon ）的定义： 存在于染色体DNA上可自主转移座位的基本单位二、转座子发现： McClintock B：1938年，提出转座基因概念 1983年，获诺贝尔生理医学奖 J.Shapiro等：1980年，证实了可移位的遗传基因存在 三、转座子的类型 1、IS （插入序列, insertion sequences） 特点（1）比较小，0.75~1.5kb; （2）只有转座酶基因 （3）两端有反向重复序列; IR（inverted repeat） IS Transposase IR 插入序列的基本结构特点 a、自身携带有转座酶基因 b、末端有反向重复序列（IR） c、转座后两端有正向重复序列（DR） ATGCA TACGT 87654321 ATGCA TACGT 转座酶基因 插入序列（insertion sequences，IS） 2、Tn （复合转座子, composite transposons） 特点： （1） 2-10kb;; （2）两端有两个相同或高度同源IS序列 （3）含转座酶基因 / 抗生素基因 Transposon makers Tn IS IS 3、TnA （TnA family） 特点： （1）5~25kb; （2）两端IR（30~40bp）相似或相同；两端无IS组件; （3）转座酶基因 / 解离酶基因 / 抗生素基因 TnA Transposase Resolvase Ampr IR IR 四，跟据转座子