定点突变试验目的定点突变质粒中DNA序列的某碱基采用.doc

定点突变 实验目的 定点突变质粒中DNA序列的某碱基（采用stratagene公司QuikChange? Site-Directed Mutagenesis Kit） 实验原理 实验过程 引物设计： PCR扩增： 反应体系：0.5ul Pfu turbo 2.5ul 10xreaction buffer 50ng 质粒模板 0.5ul primer #1 (20uM) 0.5ul primer #2(20uM) 8ul dNTP(2.5mM) add water to 25ul 反应条件： DpnＩ消化： 每25ul样品中加入0.5ul Dpn I 在37度水浴中消化1h *消化前可取１ul PCR样品电泳观察有无条带 转化： 取部分样品转化入大肠杆菌DH5?，挑取阳性克隆测序鉴定 需要订购： PfuUltra? II Fusion HS DNA Polymerase Catalog #600670 Dpn I Catalog #500402 注意事项： 引物设计时primer #1和primer #2需完全匹配 模板的纯度尽量要纯一点 可适当延长退火温度和c