LonzaNucleofector4D核转染系统培训手册-中国科学院生物化学与.PDF

™ Lonza Nucleofector 4D核转染系统 培训手册 基因有限公司生命科学组 二o 一八年七月 目 录 一、 Lonza Nucleofector™4D核转染系统技术特点 二、 系统安装条件 三、 培训所需试剂设备及样品 四、 培训程序及时间安排 五、 仪器及试剂系统介绍 六、 实验操作流程 七、 软件使用培训 八、 常见问题处理 九、 报错信息 一、 Lonza Nucleofector™4D 核转染系统技术特点 Nucleofector®技术是 Lonza 公司的专利创新技术，利用传统的点穿孔技术配合高效率 细胞转染液，通过预置的优化好的转染程序，直接把外源基因导入目标细胞的细胞核和细胞 质中。与传统的电穿孔仪相比，对于原代细胞、干细胞以及难转染的细胞系等较难转染的哺 乳动物细胞，Nucleofector®技术的转染效率更高、细胞存活率更好，最高转染效率可达 99%。 由于外源基因直接入核，所以外源基因的表达不依赖于细胞的分裂，最快在转染2 小时后就 能观察到转染进去的基因的蛋白表达。 技术优势： 1. 超高的转染效率，无论是原代细胞、干细胞还是难转染的细胞系，都可以得到高转染率。 大多数细胞系和原代细胞的转染率为 50%-70%。 2. 最广泛的转染底物，无论是系统生物学的蛋白底物、结构基因组学的质粒、功能基因组 学的 RNA，还是药物研究中的脂质体，都能够进行高效的转染。 3. 快速转染，由于转染不依赖于细胞分裂，大大减少了转染的时间，一些转染实验中可在 转染后 2-4 小时即进行检测。 4. 简单易用的系统平台，系统内置了常用转染的参数，配合对应的转染试剂即可快速完成 实验。 5. 全球共享的数据库，针对 1000 多种细胞的转染操作数据库，包括细胞处理、转染效率、 存活率等各方面验证方案，全球共享，并在不断的更新完善。细胞库中有超过 1200 种 细胞的信息可供检索，已有 6000 多篇的发表文献，并有针对不同细胞进行优化的 protocol。 应用领域： 原代细胞、干细胞、难转染细胞系转染 二、系统安装条件 1.位置要求：稳定水平的操作平台放置设备，远离热源，避免阳光直射 2.空间及载重要求： 操作平台尺寸（长×宽×高）： 45 x 10.5 x 28 cm;系统由核心单元和一个功能单元平 行拼接组成 操作平台载重： 8.0kg;系统由核心单元和一个功能单元组成 3.电源：100 –110 VAC or 230 VAC; 50 –60 Hz; 自我调节 电源功率：140VA 4.其它：通用插头接线板 三、培训所需试剂设备及耗材 实验所需试剂耗材： 细胞样品 转染底物 Nucleofector Kit 细胞培养液 胰酶 PBS或HBSS 离心机 荧光显微镜/流式细胞仪/共聚焦等 细胞计数仪或计数板 其它配套试剂设备： 离心机、移液枪，Tip头，手套等 如用户需要培训时尝试自己的样品，请在培训前提前做好相应实验准备，我们的培训将从细 胞消化开始，之前的步骤由用户自行完成。前期细胞样本准备步骤请参照 Lonza 的细胞类型 特异性 protocol 进行操作。 四、培训程序及时间安排 为保证培训效果，请安排2－4名实验室长期工作人员参加培训，并指定一名仪器负责人，以 后如有人员变动由用户自行负责内部培训。 培训时间为1天，具体培训内容如下： 1. 基本原理讲解及讨论； 2. 软件基本功能综述及使用培训； 3. 用户实际操作培训； 4. 实验和仪器操作问题答疑。 五、仪器及试剂系统介绍 1．基本原理讲解 2. 仪器系统组成和工作原理讲解 3. 配套试剂介绍 六、实验操作流程 原代细胞转染参考流程（以 HUVEC 细胞为例） 以MCF7 细胞转阳性质粒 pmaxGFP 为例，4D-X 细胞转染实验流程如下： 1）将Nucleofector Solu