脂质体转染人肝星状细胞和肝细胞条件优化.PDFVIP

第 3 1 卷 　第 1 期 华 侨 大 学 学 报 ( 自 然 科 学 版 ) Vol . 3 1 　No . 1 　 　 　20 10 年 1 月 J ournal of Huaqiao U niver sit y (Nat ural Science) J an . 20 10 　 　文章编号 : 　100050 13 (20 10) 0 1004904 脂质体转染人肝星状细胞和肝细胞条件优化 吕颖慧 , 王启钊 , 刁　勇 , 许瑞安 (华侨大学 分子药物学研究所 , 福建 泉州 36202 1) 摘要 : 　利用 L ipofect amine 2000 (Lipo) 介导 L acZ 及 E GFP 基因转染人肝星状细胞系 L X2 和人肝细胞系 Chang L iver ,探讨 Lipo 用量 、质粒用量 、转染时间、细胞初始接种密度及不同启动子驱动对转染效率的影响. ( ) ( ) 结果显示 ,两种细胞均能得到高效转染 ,Chang Liver 细胞转染效率 80 % 高于 L X2 细胞 60 % . Lipo μ μ 用量为每孔 2 L ,转染后 6 h 换液 ,L X2 细胞应用质粒 DN A 为每孔 0 . 45 g , Chang Liver 细胞应用质粒 μ ( ) DNA 为每孔 0 . 30～0 . 45 g ,此时转染效率最高. 巨细胞病毒 CMV 启动子驱动 L acZ 转染效率与 CMV 早 β ( ) ( ) 期增强子/ 鸡 肌动蛋白 CA G 启动子驱动增强型绿色荧光蛋白 E GFP 转染效率无显著差异 ;细胞初始接 种密度对转染效率无显著影响. 关键词 : 　脂质体 ; 肝星状细胞 ; 肝细胞 ; 转染效率 中图分类号 : 　Q 753 文献标识码 : 　A 体细胞基因转导技术的建立 ,使在细胞水平研究基因功能及相互作用成为可能 ,并且促成了基因运 载工具的快速研发. 病毒载体在基因转导方面具有得天独厚的优势 ,尤其是腺相关病毒载体 ,具有靶向 性 、效率高 、表达持久 、免疫原性低等优势 ,被广泛应用于体内基因转导实验中[ 12 ] . 但是 ,应用腺相关病 毒作为载体必须将 目的基因制备成相应的病毒 ,生产周期相对较长且有一定的技术难度 ,对于细胞水平 大量基因的功能筛选与评估有一定局限性. 脂质体作为技术较为成熟的非病毒载体可作为有效替代物. 脂质体介导的细胞转染是通过脂质体 DN A 复合物与细胞融合将 DN A 导入细胞 ,具有高效 、简便 、对细 胞损伤小和容易重复等优点 ,但其转染效率很大程度上取决于细胞类型及各种不同转染参数的选择[3 ] . Invit ro gen 公司的Lipof ect amine 2000 已被成功用于多种细胞的转染中 ,不但可用于 DN A 的转染 ,还 可用于 si RN A ,mi RN A 等小分子核苷酸的转染[45 ] . 本文选用可转染性人肝星状细胞系 L X2[ 6 ] 与人正 常肝细胞系 Chang Liver ,摸索 Lip of ect amine 2000 对这两种细胞的最优转染条件. 1 　材料与方法 1 . 1 　材料 ( )