免疫学-吉林大学生物基础国家级教学示范中心.DOC

免疫学实验（343008）实验教学大纲 01．教学单位名称：生命科学学院 02．实验中心名称：吉林大学国家级生物实验教学示范中心 03．课程名称：免疫学实验 04．课程代码：343008 05．课程类别：学科基础课 06．课程性质：必修（生物科学、理科实验班） 选修（生物技术、制药工程、药物制剂） 07．课程学时：32 08．课程学分：1 09．面向专业：生物科学、生物技术、制药工程、药物制剂、理科实验班 10．实验课程的教学任务、要求和教学目的 10.1教学任务： 使学生掌握和了解免疫学的主要研究方法与技术，巩固和加深基础理论知识，提高分析、解决问题的能力和开拓创新能力，培养学生严肃、严密、严格、求实的科学态度，为从事免疫学的研究和应用打下基础。 10.2教学要求： 要求学生掌握免疫学实验的基本操作和基本技能，特别是动物免疫、抗原抗体结合反应、外周血淋巴细胞的分离，酶联免疫吸附等技术。 10.3教学目的： 培养学生独立解决问题的能力，同时掌握和初步了解先进的免疫学技术和方法，如免疫印迹、免疫共沉淀等，并且进行创新实验的设计。 11．学生应掌握的实验技术及实验能力 通过本实验课程，学生应熟练掌握免疫动物的方法和程序，掌握抗体效价的测定方法，掌握免疫组织化学试验、NK细胞功能检测、免疫沉淀实验、酶联免疫吸附实验、免疫印迹实验、细胞因子检测技术及单克隆抗体制备的操作方法。 12．开设实验项目 多克隆抗体的制备项目，主要实验内容包括首先进行抗原的制备和纯化，然后用该抗原免疫Balb/c小鼠；免疫结束一周后摘眼球取血，进行免疫血清的分离和纯化；最后用Elisa法检测血清的抗体效价。 淋巴细胞功能检测实验项目，主要实验内容包括从人外周血中分离淋巴细胞并计数；用非特异性有丝分裂原或特异性抗原刺激T淋巴细胞使其向淋巴母细胞转化并用MTT法对其进行检测；用溶血空斑实验检测特异性抗原免疫的小鼠脾细胞中的B淋巴细胞产生抗体的能力。 凝集实验（示教）项目，主要实验内容包括讲授相关理论知识；进行直接凝集法检测血清抗体效价的示范教学，包括实验目的及意义、原理、材料和仪器、实验步骤的讲授等。 免疫组织化学实验项目，主要实验内容包括首先选取特定的组织材料，然后进行石蜡包埋组织、切片、组织切片的脱蜡至水、抗原修复、血清封闭、加一抗、加二抗、显色、复染、脱水、透明、封片、镜检。 NK细胞功能检测项目，主要实验内容包括取小鼠脾细胞，制备效应细胞并计数，靶细胞计数，将效应细胞与靶细胞按照一定比例加板，37℃孵育2h，取上清，加入LDH底物避光作用15min，用酶标仪测定570nm光密度值，以测定NK细胞的杀伤活性。 补体介导的细胞毒实验项目，主要实验内容包括用抗Thy-1血清与小鼠胸腺细胞相互作用，可直接激活补体产生膜攻击复合体，引起靶细胞膜损伤，进而引起细胞死亡，用台盼蓝可以使其染成蓝色，而活细胞不着色，通过显微镜计数可以算出细胞死亡率，即补体介导的细胞毒作用的强度。 细胞因子检测技术项目，主要实验内容包括向CTLL-2细胞中加入倍比稀释的含有IL-2的待测样品及IL-2标准品培养16-24小时，加入3H-TdR继续培养4-6小时，用β闪烁计数仪测定3H-TdR的参入量，以检测待测样品中IL-2的含量。 酶联免疫吸附实验项目，主要实验内容包括首先将已知的抗原或抗体吸附固定在固相载体 ( 聚苯乙烯微量反应板 ) 表面，然后封闭，加入酶标记的抗原或抗体，最后直接加入酶反应底物和显色剂进行显色反应。此抗原抗体反应在固相表面进行，用洗涤法将液相中的游离成分洗除。 免疫沉淀（示教）项目，主要实验内容包括单向免疫扩散；双向免疫扩散；免疫电泳。 免疫印迹项目，主要实验内容包括根据抗原抗体的特异性结合检测复杂样品中某种蛋白的方法。首先将含有目标蛋白的样品用SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS) 分离后，通过印迹技术将在凝胶中已经分离的条带转移至硝酸纤维素膜上，再将印有蛋白质条带的硝酸纤维素膜(相当于包被了抗原的固相载体)依次与特异性抗体和酶标第二抗体作用后，加入能形成不溶性显色物的酶反应底物，使区带染色。阳性反应的条带清晰可辨，并可根据SDS时加入的分子量标准,确定各组分的分子量。 单克隆抗体的制备项目，主要实验内容包括首先制备抗原，免疫动物，从免疫动物脾细胞中获得能合成专一性抗体的单克隆B淋巴细胞。由于这种B淋巴细胞不能在体外生长，而骨髓瘤细胞可在体外生长繁殖，应用细胞杂交技术使骨髓瘤细胞与免疫的淋巴细胞融合，筛选得到杂交瘤细胞，并将其克隆。应用单克隆细胞可制备抗一种抗原决定簇的特异单克隆抗体。这种细胞继承两种亲代细胞的特性，它既具有B淋巴细胞合成专一抗体的特性，也有骨髓瘤细胞在体外培养增殖永存的特性。 免疫共沉淀项目，主要实验内容包括免疫共沉淀是以抗体和抗原之间的专一性作