组织制片技术概述.pptVIP

组织制片的意义和目的 利用组织制片技术的方法所制出的标本，显示了组织细胞的结构和形态、组织细胞之间的相互连接及组织细胞中的某些化学成分的种类和含量。 组织制片是研究医学和生物学的一个最基本的手段。 涂片 将所采的血液、骨髓或者脱落细胞涂抹于载玻片上经瑞氏、姬姆萨染色、常规HE染色。 压片 先将组织处理成小块物质，然后用化学药品进行软化和染色，再用盖玻片压封于载玻片上。例如运动终板和寄生虫标本等。 铺片：将需要观察的薄片组织用手工的方法直接铺于载玻片上，然后经过固定、染色等程序制成。例如蛙的肠系膜铺片，大白鼠的皮下组织铺片等。 组织切片法的种类 冰冻切片 石蜡切片、火棉胶切片、明胶切片 碘酒脱汞 ：氯化汞固定的组织有汞结晶，碘酒浸泡除去。 脱甲醛色素 ：甲醛长期固定的组织易产生黑色结晶， 70％乙醇－浓氨水溶液除去。 组织漂白 ：锇酸固定的组织为黑色。漂白液漂白才上色。 脱钙：含钙组织骨、牙齿和内耳。 物理反应 细胞中有许多微小的毛细小孔，染料的色素离子通过这些小孔渗入细胞内，染料与细胞没有牢固的结合，但分散的色素离子和组织细胞分子之间通过分子间相互作用使细胞着色。 干封：切片染色经脱水和透明后，用中性树胶之类无水封固剂封固。数年不褪色。 湿封：切片染色后直接用含甘油、明胶及少量的水和防腐剂组成的封固剂封固。湿封的标本保存时间不长，主要用于某些组织化学或特殊染色的标本。 组织脱水、透明步骤脱水：70%乙醇 30`→80%乙醇30`→95%乙醇Ⅰ20` →  95%乙醇Ⅱ20` → 100%乙醇Ⅰ20` → 100%乙醇Ⅱ20`透明：苯甲酸甲酯 过夜 甲醛(Formeldedhyde) 固定浓度： 4%甲醛溶液 固定时间： 12小时—24小时 固定后处理： 流水冲洗12小时—24小时 配制方法： 甲醛10ml + 生理盐水/蒸溜水90ml 特性： 甲醛放置时间过长易产生白色沉淀“三聚甲醛”，氧化后变为甲酸，使溶液变为酸性，严重时可影响到细胞着色。 乙醇(Ethyl alcohol) 固定浓度： 80%--90%乙醇液 固定时间： 一般4小时—12小时 固定后处理： 直接入脱水剂 配制方法： 无水乙醇 + 蒸馏水 特性： 乙醇具有固定、脱水等多种功能。组织在高浓度乙醇中放置时间过长时，易发脆。 50%以上浓度的乙醇可溶解组织内脂肪、类脂体、色素等，注意制片的目的。 4%多聚甲醛液 配制方法： 多聚甲醛 4g 0.1M PBS溶液 100ml 固定时间： 24小时 固定温度 4℃ 固定后处理： 流水冲洗24小时 适用组织： 常用固定剂，适用广泛 乙醇—甲醛液（A—F液） 配制方法： 95%乙醇90ml 40%甲醛10ml 固定时间：组织块固定4—12小时， 铺片固定 5—10分钟。 固定后处理：直接入脱水剂。 适用组织：肥大细胞，糖原的固定 。 Bouin氏液 配制方法：饱和苦味酸溶液75ml 40%甲醛25ml 冰乙酸5ml 固定时间：12—24h 固定后处理：70%乙醇脱去苦味酸产生的黄色 适用组织：常备固定液，特别适用于固定皮肤和胚胎组织。 五、固定后处理 除去组织中渗入的固定液和一些由固定液产生的沉淀、结晶和色素的步骤称为固定后处理。 主要有以下六种方法： 流水冲洗 ：重铬酸钾、甲醛固定的组织，要经过流水冲洗24h。 酒精脱黄 : 含有苦味酸的固定液固定的组织，必须经过70％乙醇洗涤脱去黄色。 脱 水 一、脱水 用某种能与透明剂互溶的化学试剂将组织内的水分逐渐置换出来的过程。 要点：缓慢、彻底、勿过度。 二、常用脱水剂 乙醇、丙酮、正丁醇 乙醇 固定剂 + 脱水剂 上行酒精脱水 70%（30%）→100%，以10％递增。 丙酮 脱水强，但对组织的收缩脆化作用也强； 主要用于组织的固定兼脱水或切片的快速脱水，以保护某些特殊染色的标本不被褪色。 透 明 一、透明 对组织的最后脱水处理。 在经过前一阶段的“