原代心肌细胞培养.docVIP

　　1 材料 　　1.1 动物 　　出生后 1-4 天 SD 乳鼠 15 只。 　　1.2 试剂 　　低糖 DMEM、胰酶(含 EDTA)、青链霉素、碳酸氢钠液、新生牛血清、谷氨酰胺、D-Hanks 液。0.1%新洁尔灭、碘酒、75%酒精。 　　培养液：培养液(DMEM，新生牛血清，青链霉素)。 　　1.3 手术器械和仪器 　　铝盒、眼科直剪、眼科弯剪、眼科直镊、眼科弯剪、玻璃培养皿(共 2 套，一套用于解剖取材，另一套用于剪碎心脏组织)、100 ml 广口瓶两个(分别装碘酒和酒精棉球)、500 ml 烧杯、250 ml 锥形瓶、15 ml和 50 ml 的离心管，磁力搅拌器和搅拌子(或者水浴振荡器)、150-200 目尼龙筛网和针式滤器。 　　2 方法 　　2.1 将胰酶用 D-Hanks 液配成 0.06%的浓度，并放置于 37℃水浴中温育好。 　　2.2 解剖取材：将乳鼠放入 0.1%新洁尔灭浸泡一下后拿出，用另一把大镊子取碘酒棉球擦皮肤，再用酒精棉球脱碘。左手捏紧乳鼠颈背部皮肤以充分展露胸部，右手取一把眼科直剪剪开皮，充分撕拉开，再用酒精棉球消毒后，取一把眼科弯剪沿胸骨柄左下缘向上剪开肋骨，然后在切口中间横剪胸骨。这样只要左手稍顶，乳鼠的心脏就直接跳出来。然后用眼科弯镊从心脏中部直接将心室部分剪下，放入冰浴的 D-Hanks 液中。重复以上过程。取材完毕后，撤掉取材的手术器