一种适于家蚕细胞激素研究的双荧光素酶报告基因系统的内参.PDFVIP

生 物 工 程 学 报 刘红玲 等/一种适于家蚕细胞激素研究的双荧光素酶报告基因系统的内参质粒的构建 1631 Chinese Journal of Biotechnology /cjbcn Oct. 25, 2018, 34(10): 1631−1641 DOI: 10.13345/j.cjb.180007 ©2018 Chin J Biotech, All rights reserved ·农业生物技术· 1 1,2 1,2 1 1 1 1 1 1,2 刘红玲 ，林英 ，沈关望 ，顾健健 ，张海燕 ，吴金鑫 ，徐银莹 ，龙威 ，夏庆友 1 400716 2 400716 , , , . . , 2018, 34(10): 1631–1641. Liu HL, Lin Y, Shen GW, et al. Establishment of a suitable control reporter plasmid of a dual luciferase reporter gene system for hormone research in silkworm cell lines. Chin J Biotech, 2018, 34(10): 1631–1641. 摘 要 : 双荧光素酶报告基因系统能够提供灵敏的读数，但该系统需要依赖组成型表达的内参对读数进行归一 化。然而，大多数内参并不是在所有条件下都组成型表达。为此，文中建立了一个有效的方法制备适于家蚕细胞 双荧光素酶报告基因系统的内参质粒。首先，突变BmVgP78 启动子上的激素应答相关元件，获得了在家蚕细胞 中稳定表达的组成型启动子BmVgP78M ；然后，用BmVgP78M 替换pRL-SV40 质粒上的 SV40 启动子和嵌合内 含子序列，成功构建了pRL-VgP78M 内参质粒；最后，通过细胞转染实验证实pRL-VgP78M 内参在家蚕细胞系 中稳定表达，并且 pRL-VgP78M 内参的表达活性不受蜕皮激素、保幼激素及激素相关转录因子的影响。最终， 获得了在家蚕细胞中稳定表达且表达量适中的内参质粒pRL-VgP78M 。该内参可以有效地作为双荧光素酶报告基 因系统的内参质粒用于家蚕细胞系中激素的研究。同时，该内参质粒的构建方法也为构建适于其他物种细胞系的 双荧光素酶报告基因系统的内参质粒提供了参考。 : 家蚕，双荧光素酶报告基因系统，内参质粒，激素，方法 Received: January 5, 2018; Accepted: March 19, 2018 Supported by: State Key Program of National Natural Science of China (No. , Fundamental Research Funds for the Central Universities (No. XDJK2017B006), National Natural Science Foundation of China (No. 3147254). Corresponding author: Qingyou Xia. Tel: +86-23 E-mail: xiaqy@ (No. (No. XDJK2017B006) (No. 3147254) 2018-04-08 /kcms/detail/11.1998.Q1025.003.html 1632 ISSN 1000-3061 CN 11-1998/Q Chin J Biotech Establishment of