食品中维生素C的测定-实验讲义.docxVIP

食品中维生素C的测定 背景：食物中的总抗坏血酸（维生素C）包括还原型和脱氢型（氧化型）两种形式。食物陈旧、储存时间长久或经过烹调处理后，大部分维生素C被氧化成脱氢型。后者仍有82%左右的维生素C活性，因此此类食物经常测定其总维生素C含量。测定时首先将还原型脱氢氧化为氧化型。 2,4-二硝基苯肼法原理：将样品的还原型抗坏血酸氧化为脱氢型抗坏血酸，然后与2,4-二硝基苯肼作用，生成红色的脎。脎的量与总抗坏血酸含量成正比，将红色脎溶于硫酸后进行比色，由标准曲线计算样品中总维生素C含量。 实验仪器及试剂： 仪器：匀浆机、恒温水浴箱、721型分光光度计、容量瓶、刻度吸管、三角烧瓶 试剂：4.5 mol/L硫酸、2% 2,4-二硝基苯肼、85%硫酸、2%草酸、1%草酸、10%硫脲、活性炭、维生素C储备液、维生素C标准液 操作步骤： 样品提取：匀浆取样50 g，剪碎置均浆机中，按1:1（w/v）加入2%草酸，制成匀浆，取匀浆10 g加1%草酸稀释后倒入100 ml容量瓶中，并以1%草酸定容至刻度，过滤。 氧化：取上述滤液25 ml置100 ml三角烧瓶中，加活性炭0.5 g，振摇1 min；过滤，即氧化液。取氧化液10 ml置三角烧瓶中，加入1%草酸10 ml。 脎的形成：取试管3支，按下表操作，A为空白管，B和C为样品管。 管号 A B C 样品氧化液（ml） 2.0 2.0 2.0 10%硫脲（滴） 1 1 1 2,4-二硝基苯肼（ml） 0 0.5 0.5 37°C恒温水浴箱中保温2.5小时，取出置室温下 2,4-二硝基苯肼（ml） 0.5 0 0 脎的溶解：各管置冰浴中，缓慢加入85%硫酸2.5 ml，边加边振摇。取出试管，室温下放置30 min，于490 nm波长下比色，以A管为空白调零，测样品管的吸光度。 制作标准曲线：取维生素C标准液25 ml于三角烧瓶中，加活性炭0.5 g，振摇1 min；过滤，即氧化液。取氧化液10 ml至100 ml容量瓶中，用1%草酸定容至刻度，终浓度为10 μg/mL维生素C。取试管5支，按下表操作。 管号 1 2 3 4 5 抗坏血酸标准液（ml） 0 0.5 1.0 1.5 2.0 含抗坏血酸（μg） 0 5 10 15 20 1%草酸（ml） 2.0 1.5 1.0 0.5 0 10%硫脲（滴） 1 1 1 1 1 2,4-二硝基苯肼（ml） 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 37°C恒温水浴箱中保温2.5小时，取出置室温下。各管置冰浴中，缓慢加入85%硫酸2.5 ml，边加边振摇。取出试管，室温下放置30 min，于490 nm波长下比色，以1号管为空白调零，测各管的吸光度。以吸光度为纵坐标，维生素C为横坐标，绘制标准曲线。 计算