食品分《蛋白质及氨基酸含量测定》第9章.pptVIP

1、薄层色谱法（薄层层析法（TLC 法）Thin Layer Chromatography 简介： 近年来发展起来的一种微量而快速的层析方法，它把吸附剂或支持剂均匀的铺在玻璃板上成一薄层，把样品点在薄层上，然后用合适的溶剂展开，从而达到分离、鉴定和定量的目的。因为层析在薄层上进行，所以称为薄层层析。它的应用范围比纸上层析更广泛，常用来分析氨基酸、农药残留量、黄曲霉毒素等。 2、茚三酮比色法 原理：氨基酸在一定条件下与茚三酮起反应，生成蓝紫色化合物，可定量比色。 氨基酸的分离与测定 取一定量经水解的样品溶液，滴在制好的薄层板上，在溶剂系统中进行双向上行法展开，样品各组分在薄层板上经过多次的被吸附、解吸、交换等作用，同一物质具有相同的Rf值，不同成分则有不同的Rf值，因而各种混合物可达到彼此被分离的目的。然后用茚三酮显色，与标准氨基酸进行对比，鉴别各种氨基酸种类，从显色斑点颜色的深浅可以大致确定其含量。 原 理： Rf = a / b a b 溶剂前沿 样 点 点样原点 ① 展开时间短，一般在20—30分钟，展开距离通常只需10 cm，且分离效果好。 ② 层析后得到的斑点小而清晰。 ③ 能够使用多种显色剂。 ④ 点样量少，灵敏度高。（比纸层析高10—100倍） 精确到0.01ug。 ⑤ 也可用于大量分离＞500 mg，作为样品制备层析。 缺点：Rf值重现性比纸上层析