窖泥微生物特性及其培养.ppt

1/56 窖泥微生物特性及其培养 Characteristics and culturing methods of microbes in cellar mud 内容 一、关于窖泥 二、窖泥中的微生物 三、窖泥中微生物代谢 四、主要功能菌群分布及化学生态环境 五、人工窖泥的培养 六、窖泥培养中常用的酵母浸出物 七、酵母浸出物在种子扩培中的应用 一、关于窖泥 窖泥（Cellar mud ）： —“微生物黄金”。 2005年4月26日开始的中华世纪坛“世纪国宝展”,在第一号展柜上，一块灰褐色泥巴与秦始皇陵的划船陶俑、中国最早的人造铁器等文物一起，戴上国宝桂冠--来自五粮液古窖池，至今已有637年的历史 。 二、窖泥中的微生物 二、窖泥中的微生物（1）呼吸作用 呼吸是指在生物体中进行氧化作用的化学反应过程中，最终把氢传递给分子氧形成水或传递给其它氧化型化合物的过程。呼吸可产生较多的能量。如果氢传递给分子氧就叫做有氧呼吸，传递给其它氧化型化合物，例如硝酸盐、硫酸盐、碳酸盐等，则称之为无氧呼吸。 进行无氧呼吸的是厌氧微生物和兼性厌氧微生物。根据接受传递来的氢的化合物的不同，可分为硫酸盐呼吸、硝酸盐呼吸和碳酸盐呼吸等。 甲烷菌：严格厌氧菌，唯有厌氧滚管技术能够保证从头至尾隔绝氧气，不管厌氧袋、厌氧箱、还是厌氧罐，都不可避免会在接种或者存取过程中接触一定量的氧气，这对于“严格厌氧”微生物来说就是致命的 。甲烷菌能源和碳源物质主要有5种，即H2/CO2、甲烷、甲醇、乙酸和乙胺。 硫酸盐还原菌（sulfate-reducing bacteria，SRB）：严格厌氧菌，是一类能把硫酸盐、亚硫酸盐、硫代硫酸盐、单硫还原为硫化物的微生物。硫酸盐呼吸是自然界中硫素循环中一个不可缺少的环节，当然，硫酸盐还原形成的主要产物之一硫化氢，不仅会污染大气和水环境，而且还会造成埋藏的金属管道与建筑构件的腐蚀。 丁酸菌：又称酪酸梭菌，丁酸菌，丁酸梭状芽孢杆菌（Clostridium?butyricum）。丁酸梭状芽孢杆菌属于严格厌氧菌。 将乙醇和乙酸合成丁酸，即先有丁酸发酵。 己酸菌：该菌系对厌氧条件的要求并不严格，属于耐氧性厌氧细。菌，在一般条件下液体深层培养就能满足其生长，空气系数对芽孢和产酸的影响较小，适合于工业化生产。 己酸菌将乙醇及丁酸转化为己酸时, 必须先有丁酸发酵。 从泸香型白酒厂中分离出的己酸菌，耐气厌氧， 发酵乙醇和乙酸盐, 产生己酸、丁酸及少量的乙酸。发酵葡萄糖产微量的己酸,与巴克氏己酸菌不同。但是, 不管哪一类己酸菌, 窖泥中的多种有机酸代谢过程中产生氢，存在着微生物代谢控制的底物抑制现象。 硝酸盐还原菌：兼性厌氧菌。 如大肠杆菌, 只能将硝酸盐还原为亚硝酸盐；如地衣芽抱杆菌（Bacillus Lichenformis） 还能进一步将亚硝酸盐还原为一氧化氮、一氧化二氮和氮。 有机物氧化时产生的NADH2 和FADH2中的氢, 通过硝酸盐还原菌电子传递链将电子传递给NO3-、NO2-、NO和N2O，最后均还原成氮。 硝酸盐还原菌的电子传递链的组成和一般细菌的呼吸链不一样，电子通过电子链的传递只能产生2个ATP。 三、窖泥中微生物代谢 三、窖泥中微生物代谢（1）己酸的代谢途径 酒精和乙酸合成己酸 2CH3CH2OH+ CH3COOH → CH3( CH2 ) 4COOH+ 2H2O 酒精和乙酸先生成丁酸，丁酸再和酒精生成己酸 CH3CH2OH+ CH3COOH → CH3( CH2) 2COOH+ H2O CH3( CH2 ) 2COOH + CH3CH2OH → CH3 ( CH2 ) COOH +H2O 淀粉糖化后, 先生成丙酮酸, 丙酮酸再生成丁酸, 丁酸再与乙酸合成己酸 C6H12O6 → 2CH3COCOOH+ 2H2 2CH3COCOOH+ 2H2O → CH3( CH2) 2COOH+ CH3COOH+2O2 CH3 ( CH2 ) 2COOH + 2CH3COOH + 2H2 → CH3( CH2) 4COOH+ CH3COOH+ H2O 醅子在窖池内发酵时, 上述反应均有可能发生。在发酵的过程中, 主要是己酸菌利用生物酶促进了上述反应的发生, 使己酸能够得以大量生成。 三、窖泥中微生物代谢（2）己酸乙酯的代谢途径 CH3( CH2 ) 4COOH + ATP+ CoA~SH → CH3 ( CH2 ) 4CO?SCoA+ AMP+ Ppi CH3( CH2) 4CO ? ScoA+ CH3CH2OH → CH3 ( CH2 ) 4COOC2H5+ CoA~ SH 三、窖泥中微生物代谢（3）有机酸代谢的调节 丁酸菌在代谢过程中产生的氢被甲烷菌和硝酸盐还原菌利用，解除氢的抑制现