导细胞凋亡的信号转导.pptVIP

细胞凋亡的检测 随着研究技术的提高和对凋亡的认识不断深入，检测凋亡的方法已从细胞、染色质到分子水平日趋完善和成熟。 1. 形态学检测 2. DNA降解分析 3. 凋亡酶学分析 4. 凋亡相关蛋白分析 5. 流式细胞分析 一．细胞凋亡的形态学分析 细胞凋亡的形态学变化主要表现为：细胞皱缩(cell shrinkage)，失去细胞连接(cell junction)，微绒毛(microvilli)消失，发泡(blebbing)，染色质浓集并靠近核膜，形成沿核膜收缩的新月状体(crescents)，形成凋亡小体(apoptotic body)等。 细胞凋亡的形态学检测方法 二. DNA降解分析 DNA降解过程的特点： 1. 发生于凋亡早期，由内源性核酸内切酶激活引起 2. DNA在核小体连接部位断裂，产生180－200bp为最小单位的单体或寡聚体片断 3. DNA碎片可被细胞膜包裹，形成凋亡小体 (一) DNA凝胶电泳 原理：凋亡细胞降解产生一系列规则的DNA片断，其电泳结果呈典型的“ 梯状带”(ladder)；而坏死或凋亡后坏死细胞的DNA分解是随机的，产生的碎片分子量大小不一，在电泳时形成“ 涂片状”(smear)。 普通琼脂糖凝胶电泳、Southern blotting、放射自显影(32PdA