2019版高考生物总复习 第一部分 非选择题必考五大专题 专题五 选修部分 第15讲 基因工程及克隆技术.pptVIP

(2)形成重组DNA分子 ①通常是用相同的限制性核酸内切酶分别切割目的基因和载体DNA，形成相同粘性末端，然后用DNA连接酶将目的基因和载体DNA连接形成重组DNA分子(如下图)。但在实际操作中，可形成3种不同的连接物：目的基因—载体连接物、载体—载体连接物、目的基因—目的基因连接物。 ②因为同种限制性核酸内切酶切割目的基因和载体DNA所得粘性末端全部相同，在DNA连接酶的作用下，目的基因和载体DNA则可任意连接。为了使目的基因与质粒能定向连接，可使用两种不同的限制性核酸内切酶切割目的基因和质粒(如下图)。 (3)将重组DNA分子导入受体细胞 受体细胞 植物细胞 动物细胞或原生质体 微生物 常用方法 农杆菌转化法 显微注射技术 CaCl2处理法 转化过程 目的基因插入Ti质粒的T－DNA上→导入农杆菌→侵染植物细胞→目的基因稳定维持和表达 将重组DNA分子提纯→显微注射入受体细胞→培养、发育→获得具有新性状的生物 CaCl2处理增大细胞壁通透性→重组DNA分子与处理后的受体细胞混合→重组DNA分子进入受体细胞 (4)筛选含有目的基因的受体细胞 ①筛选原因：并不是所有的细胞都接纳了重组DNA分子，还有部分细胞接纳了载体—载体连接物、目的基因—目的基因连接物，甚至有的细胞既没有接纳重组DNA分子，也没有接纳载体—载体连接物、目的基因—目的基因连接物。 ②筛选方法：主要是利用载体上的抗生素抗性基因的作用借助一定方法(如影印接种)用选择培养基筛选。 (5)目的基因的表达 若目的基因成功表达，则转基因生物细胞中会产生相应的蛋白质(可用抗原—抗体法检测)，转基因生物会表现相应的性状(如可接种病原体观察转基因生物的抗性)。 考点3　结合植物的克隆考查科学实践能力 5.下面是关于植物克隆的问题。请回答： (1)为培育能高效吸收和富集重金属镉的转基因植物，将野外采得的某植物幼叶消毒后，用酶混合液处理，获得了原生质体。酶混合液中含有适宜浓度的甘露醇，其作用是____________。 (2)将目的基因导入到原生质体，经培养形成愈伤组织，再通过________得到分散的胚性细胞，发育成________，生长发育后获得转基因植株。 (3)愈伤组织继代次数过多会丧失细胞全能性的表达能力，下列原因错误的是________。 A.愈伤组织发生染色体畸变 B.愈伤组织不能分散成单细胞 C.愈伤组织中激素平衡发生改变 D.愈伤组织对外源激素敏感性发生改变 解析　(1)甘露醇可以维持溶液的渗透压，以防止失去细胞壁的原生质体吸水胀破。 (2)将愈伤组织放在摇床上，通过液体悬浮培养可以得到分散的单细胞，这些单细胞具有细胞质丰富、液泡小、细胞核大等胚性细胞的特征，胚性细胞发育成胚状体，进一步形成植株。(3)在长期的培养过程中，愈伤组织可能发生染色体畸变、内部激素平衡改变、对外源激素敏感性改变等变化，而丧失细胞全能性的表达能力。 答案　(1)维持渗透压　(2)液体悬浮培养　胚状体　(3)B * * 第15讲　基因工程及克隆技术 [考试要求]　1.工具酶的发现和基因工程的诞生(/a)。2.基因工程的原理和技术(/b)。3.基因工程的应用(/a)。4.提出生活中的疑难问题，设计用基因工程技术解决的方案(/c)。5.植物的克隆(/b)。6.动物的克隆(/a)。 1.(2018·浙江4月选考)回答与基因工程和植物克隆有关的问题： (1)将含某抗虫基因的载体和含卡那霉素抗性基因的载体pBI121均用限制性核酸内切酶EcoRⅠ酶切，在切口处形成____________。选取含抗虫基因的DNA片段与切割后的pBI121用DNA连接酶连接，在两个片段相邻处形成____________，获得重组质粒。 (2)已知用CaCl2处理细菌，会改变其某些生理状态。取CaCl2处理过的农杆菌与重组质粒在离心管内进行混合等操作，使重组质粒进入农杆菌，完成________实验。在离心管中加入液体培养基，置于摇床慢速培养一段时间，其目的是_______________， 从而表达卡那霉素抗性基因，并大量增殖。 (3)取田间不同品种水稻的幼胚，先进行________，然后接种到培养基中培养，幼胚发生________形成愈伤组织，并进行继代培养。用含重组质粒的农杆菌侵染愈伤组织，再培养愈伤组织，以便获得抗虫的转基因水稻。影响愈伤组织能否成功再生出植株的因素有：培养条件如光温、培养基配方如植物激素配比、以及______________________________________________________________________ ______________________________________________________________________ (答出2点即