糖类分离检测.docVIP

可溶性低聚糖检测方法的研究进展 随着人们健康意识的日益增强，过多地摄入蔗糖有可能会导致肥胖、龋齿、糖尿病等疾病的发生已成共识，许多发达国家与发展中国家在他们的“国民健康指南”中，无一例外地都劝告国民限制对蔗糖的摄入，因此对于糖的准确定量也极为迫切。目前常规的测糖的方法如菲林法、二硝基水杨酸法等化学分析方法只能测定总可溶性糖和还原糖，不能测定各种糖的含量，而后又逐渐发展了色谱法、旋光法等能够将多种糖逐一分离，准确地进行定性定量分析，因此在糖类物质的分析中占有非常重要的地位。本文主要对这些常规方法及现金检测技术进行简要的概述。 1.样品前处理 1.1 脂肪的提取 样品中脂肪含量过高会影响糖的提取，可以按以下步骤进行脱脂。将样品置于50ml离心管中，加入50ml石油醚，1800r/min离心15min，抽吸并弃去石油醚，但不要虹吸出固体物料，重复提取至脂肪完全除去。用氮气蒸发残留的石油醚，将样品转移至100ml容量瓶，用蒸馏水冲洗离心管，洗液并入容量瓶。 1.2一般食品 准确称取粉碎均匀的样品5～10g(精确至0.0001g)，置于100ml容量瓶中，加水约50ml，超声提取20min，慢慢加入50%三氯乙酸溶液5ml，用蒸馏水定容至刻度，混匀，静置30min，用干燥滤纸过滤，弃去初滤液数毫升，滤液用0.45μm微孔滤膜过滤，待上机。 1.3 糖浆、蜂蜜类样品 准确称取1～2g样品(精确至0.0001g)于50ml容量瓶，用蒸馏水溶解并定容至刻度，充分摇匀。 1.4 乳制品 含糖量10%以下乳制品(如牛奶、乳饮料、酸奶等)的称样量为5g(精确至0.0001g)；含糖量10%～40%乳制品(如糖淡奶、淡炼乳、冰淇淋等)的称样量为2g(精确至0.0001g)；含糖量40%以上乳制品(奶粉、甜炼奶等)的称样量为1g(精确至0.0001g)。对于蛋白质含量较高的样品，需要去除蛋白。使用亚铁氰化钾和乙酸锌虽然可沉淀蛋白质，但是在色谱图中会出现相应沉淀剂所产生的色谱峰，这样对单糖、双糖的分离及整个色谱系统都会产生不良影响，改用三氯乙酸作为沉淀剂后，同样达到了沉淀蛋白质的目的，而且谱图也不会受到影响。因此，需要进行蛋白沉淀处理时最好选用三氯乙酸作为沉淀剂。 1.5汽水等含有二氧化碳的饮料 吸取50ml样品置于蒸发皿中，在水浴上除去二氧化碳后，移入100ml容量瓶中，并用水洗涤蒸发皿，洗液并入容量瓶中，再加水至刻度，混匀后，滤液用0.45μm微孔滤膜过滤，待上机。 糖类的检测方法 2.1 传统检测方法 测总含糖量的方法有硫酸 酚法、蒽酮比色法等，测定其中还原糖含量的有二硝基水杨酸法、斐林氏法或铁氰化钾法等。对于糖组分的测定方法如下： (1)先用3,5-二硝基水杨酸比色法或斐林氏法、铁氰化钾法等测定还原糖葡萄糖、果糖的总量 ； (2)用碘-硫代硫酸钠法测定葡萄糖的含量 ，再用总还原糖含量 与葡萄糖含量 差值确定其中果糖的含量 ；或者用异构酶将果糖转化成葡萄糖，再按照葡糖糖的检测方法进行检测,然后计算差值； (3)最后加入酸使蔗糖水解成葡萄糖和果糖。如下图所示： 2.2糖类检测新技术 2.2.1 旋光法 葡萄糖[α]D20=52.5°、果糖[α]D20=91.9°、蔗糖[α]D20=66.6°的旋光度与浓度呈函数关系，同时具有加和性，用旋光仪进行测定。如称取蜂蜜50.0g，加水稀释至500mL ，取上述溶液100mL，再加入50 mL水，在20℃恒温条件下测定其旋光度(α1)。同样取上述溶液100mL，加入50mL6mol/L HCl ，在室温下放置，待蔗糖全部水解后，测其旋光度（α2） 。 计算方法如下： α1=52.5x+91.9y+66.6z α2=52.5(x+z)-91.9(y+z) 式中：x,y,z分别为葡萄糖、果糖、蔗糖的浓度。 2.2．2 毛细管电泳方法 电泳指在电解质溶液中，位于电场中的带电离子在电场力的作用下，以不同的速度向其所带电荷相反的电极方向迁移，由于不同离子所带电荷及性质的不同，迁移速率不同，可实现分离。毛细管电泳(CE)以高压电场为驱动力，以毛细管为分离通道，依据样品中各组分之间淌度和(或)分配行为上的差异而实现分离，CE是经典电泳技术和现代微柱分离技术相结合的产物。 单瑞峰首先将毛细管分别用0.1mol/LNaOH溶液和蒸馏水各洗涤5min, 然后, 用电泳介质0.1mol/LNaOH洗涤30min, 同时开启电化学检测器, 待整个系统稳定后, 即基线为水平直线, 电动进样一定时间, 在23kV的分离电压下进行电泳分离, 并记录电泳图。实验结果重现性良好，蔗糖、麦芽糖、葡萄糖和果糖峰高的相对标准偏差( RSD) 分别为2.15%, 4.31%, 1.22%和0.24%, 迁移时间的RSD为0.82%, 0.49