QS2634纤维素(CLL)含量试剂盒说明书.docVIP

第 PAGE 1页，共2页 货号：QS2634 规格：50管/48样 纤维素（CLL）含量试剂盒说明书 可见分光光度法 正式测定前取2-3个预期差异较大的样本做预测定 测定意义： 纤维素是由葡萄糖组成的大分子多糖，通常与半纤维素、果胶和木质素结合在一起，是植物细胞壁的主要结构成分。纤维素是一种重要的膳食纤维，是自然界中分布最广、含量最多的 一种多糖。 测定原理： 纤维素为β－葡萄糖残基组成的多糖，在酸性条件下加热能分解成β－葡萄糖。β－葡萄糖在强酸作用下，可脱水生成β－糠醛类化合物。β－糠醛类化合物与蒽酮脱水缩合，生成糠醛衍生物。颜色的深浅可间接定量测定纤维素含量。 需自备的仪器和用品： 可见分光光度计、水浴锅、可调式移液器、1mL 玻璃比色皿、80％乙醇、丙酮、浓硫酸（不 允许快递）、研钵和蒸馏水。 试剂的组成和配制： 试剂一：液体 50mL× 1 瓶，4℃保存。 试剂二：粉剂×1 瓶，4℃避光保存。 试剂三：液体 10mL× 1 支，4℃保存。 样品的前处理： 1、细胞壁的提取：取约 0.3g 样本，加入 1mL 80％乙醇，室温快速匀浆，95℃水浴 20min，冷却至室温，4000g 25℃离心 10min，弃上清。沉淀加入 1.5mL80％乙醇和丙酮各洗一遍（涡旋振荡 2min 左右，4000g 25℃离心 10min，弃上清即可），沉淀即为粗细胞壁，加入 1mL 试剂一（去除淀粉）浸泡 15 小时，4000g 25℃离心 10min，弃上清，将沉淀干燥，称重得细胞壁物质（CWM）。 2、纤维素的提取：称取烘干的 CWM 约 5mg，加入 0.5mL 蒸馏水充分匀浆，匀浆液转移至 EP 管中，用蒸馏水定容至 0.5mL，置于冰水浴中，缓慢加入 0.75mL 浓硫酸，混匀，冰水浴中静置 30min。8000g 4℃离心 10min，取上清液，用蒸馏水稀释 20 倍后待测。 测定步骤： 1、分光光度计预热 30min 以上，调节波长至 620nm，蒸馏水调零。 2、调节水浴锅至 95 度。 3、工作液的配制：在试剂二中加入 4mL 试剂三，充分溶解，如较难溶解，可加热搅拌；用 不完的试剂 4℃保存一周； 4、加样表（在 EP 管中反应）： 试剂（μL） 空白管 测定管 样本 300 蒸馏水 300 工作液 70 70 浓硫酸 630 630 混匀，置 95度水浴中 10min（盖紧，以防止水分散失），冷却至室温后，于 620nm 处，分 别读取空白管和测定管吸光值，ΔA=A 测定管-A 空白管。 注意： 1、空白管只要做一管。 2、由于浓硫酸具有强腐蚀性，请谨慎操作。 纤维素含量计算： 1、标准条件下测定的回归方程为y=5.25x-0.0019；x 为标准品浓度（mg/mL），y 为吸光值。 2、按样本质量计算： 纤维素（mg /g 干重）= [(ΔA＋0.0019) ÷5.25×V1]÷（W×V1÷V2）×20 =4.76×(ΔA＋0.0019)÷W 3、按样本蛋白浓度计算： 纤维素（mg /mg prot）=[ (ΔA＋0.0019) ÷5.25×V1]÷(V1×Cpr) ×20 =3.81×(ΔA0.0019)÷Cpr。 V1：加入样本体积，0.3mL；V2：加入提取液体积，1.25mL； Cpr：样本蛋白质浓度，mg/mL； W：样本干重，约 5×10-3 g；20：样本稀释倍数。 注意：最低检测限为 1mg/g 干重或 10ng/ mg prot