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α-淀粉酶活性的测定 1.α-淀粉酶抑制剂对PPA 活性的抑制作用 分别取浓度为0.2、0.4、0.6、0.8、1.0 mg/mL 的柚皮素溶液0.05mL（溶于水）与0.2 mL PPA 溶液（0.33 U/mL，溶于pH 6.8 磷酸盐缓冲液）混匀在37 ℃水浴反应20 min。对照组溶液则以0.05 mL水与0.2 mL PPA 溶液进行反应。在反应液中加入1mL 1 %可溶性淀粉溶液，继续37 ℃水浴10 min 后，加入1.5 mL DNS 显色剂，混匀，置于沸水浴中5 min。然后，冷却至室温，定容至25 mL，540 nm 下测定吸光。空白是1.25ml水加上1.5mlDNS，定容至25ml，在A540nm下测吸光值根据下式计算柚皮素对PPA 活性的抑制率：抑制率（%）=[（ΔA 对照-ΔA 样品）/ΔA 对照] ×100%注：ΔA 对照=A 对照-A 对照空白，ΔA 样品=A 样品-A 样品空白 编号 　抑制浓度(mg/ml) 抑制剂（ml） PPA 水 1 0.2 0.05 0.2 0 2 0.4 0.05 0.2 0 3 0.6 0.05 0.2 0 4 0.8 0.05 0.2 0 5 　1,.0 0.05 0.2 0 对照组 　 　 0.2 0.05 按图加完药品后，在反应液中加入1.5mL 1 %可溶性淀粉溶液 继续37 ℃水浴10 min 后，加入1.5 mlDNS 显色剂，混匀，置于沸水浴中5 min。然后，冷却至室温，定容至25 mL，540 nm 下测定吸光。空白是1.25ml水加上1.5mlDNS，定容至25ml，在A540nm下测吸光值  α-淀粉酶Km的测定 一、实验步骤：取试管5个，并分别编号，按下表加入药品 Km1的测定 酶催化体系 　 反应体系 编号 底物（淀粉） 　 淀粉酶 抑制剂（ml） 水 DNS（ml） 反应液（ml） OD 还原糖浓度（mg/ml） 浓度 体积 0.2 0 0 1.5 1.25 　 　 1 0% 1 0.2 0 0 1.5 1.25 　 　 2 0.25% 1 0.2 0 0 1.5 1.25 　 　 3 0.50% 1 0.2 0 0 1.5 1.25 　 　 4 0.75% 1 0.2 0 0 1.5 1.25 　 　 5 1% 1 0.2 0 0 1.5 1.25 　 　 Km2的测定 酶催化体系 　 反应体系 编号 底物（淀粉） 　 淀粉酶 0.02mg/ml抑制剂（ml） 水 DNS（ml） 反应液（ml） OD 还原糖浓度（mg/ml） 浓度 体积 0.2 0.05 0 1.5 1.25 　 　 1 0% 1 0.2 0.05 0 1.5 1.25 　 　 2 0.25% 1 0.2 0.05 0 1.5 1.25 　 　 3 0.50% 1 0.2 0.05 0 1.5 1.25 　 　 4 0.75% 1 0.2 0.05 0 1.5 1.25 　 　 5 1% 1 0.2 0.05 0 1.5 1.25 　 　 Km3的测定 酶催化体系 　 反应体系 编号 底物（淀粉） 　 淀粉酶 0.04mg/ml抑制剂（ml） 水 DNS（ml） 反应液（ml） OD 还原糖浓度（mg/ml） 浓度 体积 0.2 0.05 0 1.5 1.25 　 　 1 0% 1 0.2 0.05 0 1.5 1.25 　 　 2 0.25% 1 0.2 0.05 0 1.5 1.25 　 　 3 0.50% 1 0.2 0.05 0 1.5 1.25 　 　 4 0.75% 1 0.2 0.05 0 1.5 1.25 　 　 5 1% 1 0.2 0.05 0 1.5 1.25 　 　 再从标准曲线中查出还原糖的含量，以1/V为纵轴，1/S为横轴做直角坐标。