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破骨细胞钠氢转运蛋白关键位点研究 黄晓斌，仲蕾蕾 （400030重庆，重庆大学农学及生命科学研究院） [摘要]目的 在酿酒酵母中异源表达人破骨细胞分化成熟潜在因子钠氢转运蛋白2，对其关键氨基酸保守位点进行突变分析，鉴定其作为盐离子载体转运Na+的功能。 方法 采用突变试剂盒依次把此蛋白的D278和D279 2个位点的天冬氨酸中1个氨基酸突变成半胱氨酸，得到2个不同位点突变的定点突变体；构建酵母双基因表达载体，通过电穿孔的方式转入到酵母菌株中；Western印迹检测2个定点突变基因在酵母菌株的表达；通过NaCl选择压力显示2个突变体在高盐环境中的相互作用，观察菌株的抗盐生长表型。结果 成功获得适合转化酵母的多个载体；在固体和液体培养基中，经半乳糖诱导后，各个载体均可使酵母异源表达钠氢转运蛋白2；生长曲线显示2个突变体可相互作用，部分恢复酵母菌株的抗盐能力。 结论 钠氢转运蛋白2通过关键位点D278和D279 2，以形成二聚体的方式在细胞中发挥着钠离子转运功能。 [关键词] 破骨细胞；钠氢转运蛋白2；酿酒酵母 [中图法分类号] [文献标志码] A Key point of Na+-H+ antiporter to transport sodium in osteoclast Huang Xiaobin, Zh