人乳头瘤病毒基因分型液态芯片构建中的影响因素.docVIP

PAGE PAGE 1 人乳头瘤病毒基因分型液态芯片构建中的影响因素 党倩丽1，陈 超2，杜 篷2，杜艳华2 ， 冯 捷3 (1陕西省人民医院皮肤科, 西安 710068；2西北大学生命科学院, 国家微检测系统工程技术研究中心, 西安 710069；3西安交通大学第二医院，西安710003) 摘 要：目的 基于Luminex?100技术平台，构建人乳头瘤病毒补充英文全称，简称。基因分型液态芯片；探讨在构建HPV基因分型液态芯片过程中的影响因素。方法 在LuminexTM平台上，采用国际公认的标准HPV质粒来评价构建的13种基因分型HPV 芯片的敏感性、特异性和可重复性，选择通用引物、探针，将探针有效的偶联到微球上。优化PCR体系和杂交体系，检测反应中PCR浓度、杂交反应时间、微球的时效等对构建芯片的影响，测定标准质粒变异系数(CV)值。结果 采用构建的HPV液态芯片，可准确区分HPV基因型。对349例标准样本检测结果进行回代特别函数判别分析，检测准确率在96.7%以上。对构建芯片条件进行分析，杂交反应时间对杂交反应结果在一定的杂交时间内有明显的影响；当PCR产物不同浓度范围时，PCR产物的浓度对荧光值有不同的影响，各型HPV探针CV范围在0.41%～14.69%之间。结论 杂交反应时间、样品PCR反应中的污染、微球的时效和探针的质量等均可以影响液态芯片系统的构建。构