科学基金标书下载－一个新基因p55与小鼠胚胎着床和蜕膜化的关系.doc

名 称 中 文 一个新基因p55与小鼠胚胎着床和蜕膜化的关系 英 文 The Functions of a Novel Gene p55 in Mouse Embryo Implantation and Decidualization. 研究类别 基础研究 g 应用研究 ¨ 技术开发 ¨ 项目来源 国家重点项目 ¨ 省市或部门重大项目 ¨ 自选项目 ¨ 863高技术研究项目 ¨ 国家自然科学基金项目 ¨ 其他项目 g 研究经费 来 源 及 数 额 无 项目的具体内容、预期目标及国内外在这方面研究的现状： 具体内容: 在进行小鼠不同发育阶段的mRNA差异表达研究过程中，我们发现了一种未报道过功能的新基因p55（分子量为55K）。我们采用原位杂交检测发现，p55基因在妊娠第7.5天小鼠子宫中的蜕膜区高度表达，并发现该基因是转录因子YY1调节的下游基因。由于YY1 基因敲除小鼠在围着床期死亡，p55基因很可能在小鼠胚胎着床和蜕膜化期间发挥着重要作用。本项目将利用原位杂交、免疫组化、反转录PCR、RNA干涉等技术，详细研究p55在小鼠早期妊娠子宫及胚胎中的表达规律，通过假孕、延迟着床及人工蜕膜化等实验动物模型确定p55在胚胎着床及蜕膜化中的作用，并采用卵巢切除模型研究激素对p55的表达调节。由于p55基因的功能到目前为止尚未见报道，本项目将有助于揭示p55基因的功能及其与胚胎着床的关系，为治疗人类不孕症、特异的避孕药物提供、提高家畜的繁殖率及开发胚胎着床等重要的理论依据。 预期目标： 通过小鼠假孕、延迟着床、人工蜕膜化及卵巢切除等动物模型，采用原位杂交、免疫组化、RT－PCR、Northern Blot等实验方法，详细研究p55基因在小鼠子宫及胚胎中的表达；明确p55基因在胚胎着床及蜕膜化中的作用。并利用RNAi技术进一步研究p55基因表达对胚胎着床的影响。由于p55基因功能到目前为止尚未见报道，本研究将有助于揭示p55基因功能和进一步了解胚胎着床的分子机制，为治疗人类不孕症、提高家畜的繁殖率及开发胚胎着床特异的避孕药物等提供重要的理论依据。  国内外在这方面研究的现状： 胚胎着床是一个涉及到子宫与胚胎间紧密对话的复杂发育过程。成功的胚胎着床需要类固醇激素、生长因子、细胞因子、转录因子和脂类介质等分子的协同作用 (Paria et al, 2001)。利用基因芯片比较小鼠胚胎着床位点和非着床位点的差异性表达时发现，在小鼠子宫的胚胎着床点处有36个基因上调，27个基因下调。比较人子宫内膜在胚胎着床窗口开放期与增殖晚期的基因表达变化，共分析了12686个基因，在胚胎着床窗口开放期有156个基因的表达上调，而377个基因的表达下调(Kao et al, 2002)。然而，有意思的是，在上述有关胚胎着床的基因芯片研究中，以前已证实与胚胎着床紧密相关的许多基因，如白血病抑制因子LIF(Stewart et al, 1992)、环氧合酶-2（COX-2）、肝素结合样表皮生长因子（HB-EGF）及肝素硫酸盐蛋白多糖（perlecan）(Paria et al, 2002)、basigin和前列腺素E合成酶（mPGES）基因(Xiao et al, 2002; Ni et al, 2002)，均未在这些研究中得到证实。看来采用传统的方法研究与胚胎着床相关的基因是非常有必要的。 我们在进行小鼠不同发育阶段的mRNA差异表达研究时，发现了一个功能未知基因，暂时命名为p55基因。通过Northern Blot发现p55基因在多种小鼠组织中广泛表达。我们已经通过实验确定了小鼠p55基因启动子，在其最小的上游启动子中存在Yin Yang 1 (YY1)的调节元件。通过凝胶阻滞实验（EMSA）分析表明， HeLa和NIH3T3细胞核抽提物以及纯化的GST－YY1蛋白均能与合成的YY1寡核苷酸探针形成DNA－蛋白质复合物。并且，YY1区的突变导致p55基因启动子活性明显下降（Ding et al，待发表）。YY1是一个具有多种功能的转录调节因子。YY1 基因敲除小鼠胚胎能够着床并发生蜕膜化，但迅速退化，在围着床期发生死亡； YY1－/－纯合子囊胚内细胞团和滋养外胚层缺陷，将其移入假孕YY1＋/＋小鼠子宫，胚胎不能发育到原肠胚，在围着床期也发生死亡。这表明YY1 对于小鼠早期胚胎发育是至关重要的，推测在着床期YY1可能调控着一些小鼠胚胎细胞迅速增殖和分化所必需的基因(Donohoe et al，1999)。既然p55基因是YY1调节的基因，暗示它可能在小鼠胚胎着床期间发挥重要的作用。 进一步分析启动子序列还发现，在最小的p55基因启动子上游还存在一个过氧化物酶体增殖因子活化受体 （peroxisome proliferator-