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第十一章 柠檬酸循环 柠檬酸循环概貌 第一节 丙酮酸氧化－进入柠檬酸循环的准备阶段－－形成乙酰－CoA 一、丙酮酸脱氢酶复合体或丙酮酸脱氢酶系 （由三种酶高度组合在一起） 参与反应的3种酶分别是：丙酮酸脱氢酶（E1）组分、二氢硫辛酰转乙酰基酶（E2）、二氢硫辛酸脱氢酶（E3）。 辅助因子：辅酶A、NAD+、硫胺素焦磷酸（TPP）、硫辛酰胺和黄素腺嘌呤二核苷酸（FAD）等。 二、丙酮酸脱氢酶复合物催化的反应 丙酮酸脱氢酶复合物催化五步反应，其总反应是： CH3－CO－COO-＋CoA－SH＋NAD+→CH3－CO~CoA ＋CO2＋NADH ΔG=－33 kJ/mol 在丙酮酸脱氢酶复合物催化的反应中涉及五种不同的辅酶，它们分别是焦磷酸硫胺素（TPP）、硫辛酸、辅酶A、烟酰胺腺嘌呤二核苷酸和黄素腺嘌呤二核苷酸。 这些辅酶在该酶复合物催化反应中的功能列于表11－1中。丙酮酸脱氢酶复合物催化反应的顺序如图11－1所示。 （一）丙酮酸脱氢酶 丙酮酸脱氢酶（E1）在酶促反应中需要ATP。在该酶的催化下，丙酮酸脱羧，并产生羟乙基－TPP中间物（见图）：该反应与酵母丙酮酸脱羧酶催化的反应相同。 酶促反应产生的羟乙基在同一种酶的催化下，被转移到二氢硫辛酰转乙酰基酶的硫辛酰胺基上（图11－2）。 催化丙酮酸转变为乙酰－CoA的反应步骤 （二）二氢硫辛酰转乙酰基酶 二氢硫辛酰转乙酰基酶（E2）催化一个转酯基反应。在该反应中，乙酰基被转移到CoA的巯基上，产生乙酰 CoA 和二氢硫辛酰胺－E2： 二氢硫辛酰转乙酰基酶含有一个硫辛酰胺残基，硫辛酰胺是由硫辛酸与该酶蛋白的一个Lys 残基的 ε－氨基共价连接构成（图11－3）。 硫辛酰胺参与酶促反应的部位是它的环状二硫化物。能可逆还原产生二氢硫辛酰胺。 在丙酮酸脱氢酶催化下，由丙酮酸脱羧产生的羟乙基攻击硫辛酰胺的二硫化物，并使TPP释放出来。当硫辛酰胺的二硫化物被还原时，含负碳离子的羟乙基被氧化成乙酰基（图11－2）。 （三）二氢硫辛酰脱氢酶 二氢硫辛酰脱羧酶是整个丙酮酸脱氢酶复合物不可缺少的部分。 尽管在上面的反应中乙酰CoA已经形成，但是与E2结合的硫辛酰胺必须重新产生，才能完成一次催化循环。 二氢硫辛酰脱氢酶含有一个反应性的二硫键和一个精密结合的FAD。 在该酶的催化下，二氢硫辛酰胺被氧化，并伴随着该酶本身的还原（如图）： 还原性的二氢硫辛酰脱氢酶（E3）被FAD氧化，产生FADH2。接着FADH2上的电子在该酶的催化下转移给该酶的另一个底物NAD＋，生成NADH： 三、辅酶A是重要的酰基载体 辅酶A是维生素B3的衍生物。泛酸也是酰基载体蛋白的组分。泛酸在自然界分布广泛。 辅酶A是由等摩尔的泛酸、核糖C－3‘位具有磷酸基的ADP和巯基乙胺（图11－4）。辅酶A主要起着传递酰基的作用，分子中的－SH可以接受或供出酰基。 辅酶A与各种酰化反应有着密切的关系，是具各种酰化反应的辅酶。辅酶A主要起着传递酰基的作用，分子中的－SH可以接受或供出酰基。因此，辅酶A与各种酰化反应有着密切的关系，是各种酰化反应的辅酶。酰化辅酶A的形成是分布进行的，涉及到酰基辅酶A的形成与转移。 第二节 柠檬酸循环 一、柠檬酸循环的发现 柠檬酸循环也叫做三羧酸循环或者Krebs循环，完整的柠檬酸循环如图11－5所示。 二、柠檬酸循环的反应历程 柠檬酸合酶催化乙酰CoA与草酰乙酸的缩合，生成柠檬酸。这是柠檬酸循环的起始反应。柠檬酸合酶催化的反应遵循有序反应机制。 X射线研究表明，柠檬酸合酶游离的二聚体呈现一种“开放”的形式，两个结构域形成一个裂缝，含有草酰乙酸的结合部位。 在提出的反应机制中，柠檬酸合酶的三个可解离的侧链参与了催化反应（图11－6）。 （二）异柠檬酸的形成 柠檬酸在顺乌头酸酶的催化下，异构化转变成异柠檬酸。顺乌头酸是这一转变反应的中间物（见图）； 该步反应是可逆的，ΔG＝＋6.3 kJ/mol，反应有利于柠檬酸。因此，在平衡时，异柠檬酸大约只占10％。 柠檬酸是一种前手性分子，然而顺乌头酸酶却能对柠檬酸两端的两个相同的基团具有选择性。对这种选择的解释是：根据酶作用的立体专一性，酶分子活性中心是不对称的，有三个不同的结合部位，这三个不同的结合部位只有在与底物分子的三个不同的取代基互补时，该酶才能进行催化。 柠檬酸的中心碳连接有四个取代基，其中两个是相同的。但是这两个相同的基团在空间取向上是不同的，也就是说在空间上是可以区别的（图11－7）。 因此，当柠檬酸与顺乌头酸酶的活性部位结合时，酶活性部位的微环境能区别在空间取向上不同的两个相同的基团，使得两个相同的基团中只有一个被酶作用，而另一个则不能被酶催化。 （三）异柠檬酸的氧化脱羧 异柠檬酸脱氢酶催化异