分子量分布的测定.ppt

高效液相色谱仪虽然品牌多，有许多生产厂商，但都由五部分组成，即： 流动相系统（储存和输送液体设备） 分离系统（色谱柱） 进样系统 检测系统 控制和数据处理系统 8.2 凝胶色谱 流动相系统——在气相色谱中，作为流动相的载气仅起冲洗作用。而在HPLC中，不同的流动相其极性、浓度、粘度差异较大，可供选择的流动相也较多。同时，在色谱柱中流动相不仅起冲洗作用，还参与分离过程，对分离效果影响较大。 流动相系统由流动相贮槽、脱气装置、高压泵和程序控制器组成。 高压泵是HPLC中的重要部件，它直接影响仪器性能。要求高压泵能抗溶剂腐蚀、流量恒定、无脉动、有较大的调节范围、输出压力达15～45MPa、泵的死体积小。 程序控制器（即梯度装置或比例阀）的功能是按照一定的程序连续改变流动相组成，以实现梯度洗脱。 8.2 凝胶色谱 分离系统——是HPLC的心脏部分，由预柱、色谱柱、恒温箱、柱后衍生装置等组成。 色谱柱是用内部抛光的直形不锈钢柱制成，长度一般为10～60cm。柱内径依照用途不同是不一样的，分析柱约为2～4mm；凝胶柱约为7～10mm；而制备柱的内径可超过25mm。预柱的长度短，内径与色谱柱匹配。 恒温箱用于存放色谱柱，同时通过加热或冷却装置，为色谱柱以及流动相提供恒温条件。 柱后衍生装置主要根据分析要求而设在色谱柱后和检测器前的一种附件。 8.2 凝胶色谱 8.2 凝胶色谱 进样系统——进样系统包括手动进样和自动进样。无论手动进样还是自动进样，都要通过六通阀。六通阀进样是高压系统的需要，既不影响系统的正常运行又能让样品进到系统中去。 检测系统——在GC中，流动相与被测组分的物理性质差别较大，检测比较溶液。在HPLC中，流动相(溶剂)与被测组分(溶质)的物理性质往往很相似，检测比较困难，一般采用以下几种方式： 测定柱后流出液总的物性变化。采用诸如示差折光检测器、电导检测器等； 采用对流动相无讯号，而对被测组分敏感的检测器，如紫外检测器、荧光检测器等； 在检测之前除去流动相，如质谱检测器。 目前，使用较多的检测器是紫外检测器(UVD)和示差折光检测器(RID)。在具体使用中可视分析要求和样品组分的性质应选用不同的检测器。 几种常用检测器性能见教材196页表8-5。 8.2 凝胶色谱 依照凝胶色谱的特点，测定聚合物分子量分布曲线的同时，需能同时测定每个级分的浓度和分子量，因此除了在一般HPLC种使用的浓度检测器外，还配有分子量检测器。 分子量检测方法有两大类： 1. 间接测定法——通过测定洗脱体积或保留时间推测相应分子量 该法的优点是仪器设备简单，但不能直接得出分子量的数值，需采 用标准曲线进行校正。 2. 直接测定法(如粘度法和光散射法等) 粘度法——用自动粘度检测器测定柱后流出液特性粘度[η]。 依照Mark-Houwink方程计算而得分子量。 光散射法——用此法可以直接测定洗脱液中聚合物的重均分子 量，是一种测定绝对分子量的方法。 控制和数据处理系统——包括计算机、色谱工作站、谱库软件等。完成数据采集和对仪器的控制工作。 此外，还有气源、废液回收瓶等辅助系统。 8.2 凝胶色谱 8.2 凝胶色谱 8.2.3 凝胶色谱分离机理 1. 凝胶色谱的色谱过程方程 凝胶色谱是用多孔填料填充的，其分离能力与填料孔径有关。 GPC柱的总体积由三部分组成，即填料骨架体积、填料孔体积和填料粒间体积。其中填料骨架体积对分离不起作用，柱空间体积主要由后两部分组成。因此，当把第4章中的色谱过程方程 VR = VM ＋ KVS 用于凝胶色谱时，VM代表填料粒间体积，VS代表填料孔体积。VR也称为洗脱体积。样品在分离过程中，大分子的保留体积为VM，小分子的保留体积则为VM＋VS。因此，分配系数应在0与1之间，即0≤K≤1。 8.2 凝胶色谱 2. 凝胶色谱分离机理 对上述凝胶色谱的色谱过程方程，不同的学者从不同的角度设计了各种模型进行解释，并运用分子参数和柱结构参数计算了VR和 K值。目前模型机理有三种： 平衡排除理论—— 限制扩散理论—— 流动分离理论—— 8.3 凝胶色谱的数据处理 8.3.1 凝胶色谱图 8.3.2 分子校正曲线 8.3.3 分子量分布计算 8.3.4 峰扩展的校正 8.3 凝胶色谱的数据处理 8.3.1 凝胶色谱图 凝胶色谱谱图与一般色谱图一样，横坐标代表色谱保留值，其值表示样品的淋洗体积或级分，与分子量的对数值成正比例，表征样品的分子量；纵坐标为流出液的浓度，其值与该级分的量有关，表征样品在某一级分下的质量分数。因此凝胶色谱图可以看作是以分子量的对数值为变量的微分质量分布曲线。