动医13—2-热孜万古丽。米吉提-毕业论文1.pptVIP

新疆驴皮肤组织RNA的提取与检测;;目的和意义;材料与方法;2.1.4 主要的实验试剂 Tirzol分装瓶,75%乙醇,0.1%DEPC水，氯仿，异丙醇，液氮,TBE，EB，超纯水； 2.1.5 实验试剂的配制 1)0.1%DEPC水的配置： 2）无RNA酶灭菌水： 3）75%乙醇: 4）琼脂糖凝胶的配置： 5）电泳缓冲液（5×TBE）的制备：;2.2.1实验前的准备 玻璃器皿180℃的高温下干烤4h或更长时间。 塑料器皿用0.1% DEPC水浸泡12小时后，高压灭菌后备用。 凡RNA提取用到的试剂，必须用无RNA 酶灭菌水配置。 实验前一天用84消毒液对实验室进行彻底消毒；用75%酒精擦拭超净工作台面，并开紫外灯照射2h。 操作前再次用75%酒精擦拭台面，操作人员必须戴无RNA酶手套、口罩和帽子，操作时经常更换一次性手套和口罩。 ;2.2.2 Trizol法提取RNA的操作步骤 1)液氮研磨：向研钵中加入液氮降温研钵3次。加入液氮，在液氮中将组织敲碎后用力研磨，待组织变软时，再加少量液氮，研磨成粉末状，按每50-100mg组织加入1.5mlTrizol，继续研磨后轻轻混匀，转移入1.5ml离心管。 2）室温裂解：室温放置5min，使其充分裂解。 3）4℃，12000rpm离心10min，取上清液于另一离心管。室温放置5min，使其充分裂解。;4）按300ul氯仿/1.5mLTrizol加入氯仿，盖紧离心管，漩涡振荡混匀离心管15秒，室温放置5分钟。 5）4℃,12000rpm离心15min 。 6）管子倾斜45度，用移液管吸取上层水相，至另一新的离心管中。按0.75ml异丙醇/1.5mLTrizol加入异丙醇混匀，室温放置5-10min。 7）4℃,12000rpm离心10min，弃上清，RNA沉于管底。 8）按1mLTrizol加入1.5mL75%乙醇，温和振荡离心管，悬浮沉淀。 ; 4℃,7500rpm离心5min。此步骤重复两次。 9）小心弃去上清液，再用小离心机离心数秒，用20ul的枪移走剩余的水，然后室温或真空干燥5-10分钟。 10）用无酶水20uL吹打几次，溶解RNA，并用封口胶封住EP管的口，必要时可55℃-60℃水溶10-15分钟。 2.3 RNA的纯度检测 取1ul样品,用微量紫外分光光度计测定浓度和吸光度。 2.4 RNA完整性鉴定 用1％的琼脂糖凝胶电泳，来检测所提总RNA的质量。 ;3.结果;3.2 提取RNA的电泳分析图 ;结果表明，RNA完美提出来的话应该??三条带：28S rRNA，18S rRNA和5S rRNA。在琼脂糖凝胶电泳图1和图3看到28S rRNA条带不清晰，比18S rRNA条带暗，说明完整性不太好。在图2和图4上可以清晰地看到28S和18S rRNA，说明RNA完整性和质量较好。5S基本很模糊。;4结论;Thank You !