植物组织培养1112005.ppt

植物的组织培养技术 植物组织培养知识概要 组培应用前景： 1、作物育种上的应用 1）花药和花粉培养 2）胚胎培养 3）细胞融合 4）基因工程 5）培养细胞突变体 6）种质保存 2、作物脱毒和快繁上的应用（马铃薯，兰花） 3、在植物有用产物生产上的应用 4、在遗传、生理、生化和病理研究上的应用 1、茎尖：园艺植物组织培养中应用最多，繁殖 率高，不易发生遗传变异，但取材有限 2、茎段：采用嫩茎的切段促进腋芽萌发，取材 容易 3、叶：幼嫩叶片组织通过愈伤组织或不定芽分 化产生植株，取材容易，操作方便，但易发 生变异 4、花球和花蕾 5、种子、根、块根、块茎、花瓣等 消毒剂与外植体应接触足够长的时间以除去外植体表面的微生物，但应尽量减少对外植体细胞的破坏。 四、实验准备 培养基母液的配制： 大量元素（20×） 微量元素（1000×） 维生素（200×） 铁盐（200×） Gly（500ppm） KI(500ppm) 6-BA（500ppm） 培养基配方 1）M S培养基 （pH5.8-6.0），高温蒸汽灭菌 培养基种类： 诱导培养基： 1/2MS培养基 诱导培养基1： MS＋1.0ppm的2,4-D 诱导培养基2： MS＋2.0ppm的2,4-D 分化培养基：MS＋6-BA（500ppm）1mL/L +500ppm IAA（其中的蔗糖浓度为20g/L） 四、实验准备 培养基母液的配制： 大量元素（20×） 微量元素（1000×） 维生素（200×） 铁盐（200×） Gly（500ppm） KI(500ppm) 6-BA（500ppm） 培养基配方：同实验一 四、实验准备 培养基母液的配制： 大量元素（20×） 微量元素（1000×） 维生素（200×） 铁盐（200×） Gly（500ppm） KI(500ppm) 6-BA（500ppm） 1）实验仪器：已灭菌的培养皿（内盛有300－400目的镍网）、100mL和250mL的三角瓶、直径1.5cm的小培养皿、离心管、过滤器；离心机、超净工作台、药勺、镊子、锡箔纸、纸、绳、真空抽滤泵。2)培养基：P5培养基  油菜种子 愈伤组织 萌发小苗 愈伤组织诱导和继代培养 继代15天的愈伤组织 继代0天的愈伤组织 愈伤组织继代培养 愈伤组织 再生植株 再生植株 愈伤组织继代及分化培养 植物的无性快繁技术 实验二 掌握植物的无性快繁技术。 一、实验目的 将植物再生苗的茎切断或将芽分开，接种到合适的培养基中，利用不同激素的浓度，每个茎段芽或芽都可以长成一株小苗，并且最终发育成完整的植株。 二、实验原理 1）实验仪器：培养皿、100 mL三角瓶、 镊子、超净工作台、酒精灯、锡箔纸、剪 刀、灭菌锅。 2）实验材料：烟草无菌苗 三、实验设备及用具 培养基种类： MB培养基：MS＋6-BA（500ppm）1mL/L +500ppm IAA（其中的蔗糖浓度为20g/L） 烟草无菌苗茎段的无性快繁 将分化培养基中的烟草无菌苗，用镊子和剪刀取下高1cm左右大的茎段，转移到MB培养基上，摆好，封口，置于25℃的温室中光照下培养。（此培养基含有大量的萘乙酸，可以诱导生根。在此所用的三角瓶要求大一些，以利于长出的小苗的生长。） 五、实验步骤 烟草无菌苗茎段的无性快繁培养 烟草无菌苗 无菌苗茎段 无菌苗茎段 实验三 植物原生质体的分离和培养 掌握植物原生质体培养和植株再生技术。 一、实验目的 植物细胞在纤维素酶、半纤维素酶和果胶酶的作用下，细胞壁被消化，可以得到裸露的原生质体，原生质体在合适的培养条件下，能再生细胞壁，并且进行分裂、生长，形成愈伤组织，进一步分化形成根和芽、叶等，最终形成新的植物体，表现了细胞的全能性。 要进行原生质体培养，首先要分离得到具有活力的原生质体。 。 二、实验原理 1）实验仪器：培养皿、100 mL三角瓶、 镊子、超净工作台、酒精灯、锡箔纸、剪 刀、灭菌锅。 2）实验材料：烟草无菌苗 三、实验设备及用具 1、实验用品： * * 主讲人：向凤宁 植物学大实验 植物组织培养（Plant Tissue Culture）：是指通过无菌操作分离植物体的一部分（外植体,explant