DNA的损伤和修讲解.ppt

（四）DNA交联 链间交联：DNA双螺旋链上一条链上的碱基和另一条链上的碱基以共价键结合 链内交联：DNA分子中同一条链内的两个碱基以共价键结合 DNA－蛋白质交联：DNA和蛋白质以共价键结合 * 第二节 DNA损伤的修复 DNA损伤的修复：指纠正错配的碱基，清除DNA链上的损伤，恢复DNA正常结构的过程。 常见的DNA修复方式：直接修复、切除修复、错配修复和重组修复 * (一）直接修复 直接修复 细胞对DNA的某些损伤可以用很简单的方式加以修复在单一基因产物的催化下，一步反应就可以完成。这种修复方式叫直接修复。 包括：酶光学复活、嘌呤的直接插入、O6－甲基鸟嘌呤－DNA甲基转移、单链断裂重接等。 * 1）、酶学光复活（photo reactivation ） ----TT---- ----AA---- PR PR ----TT---- ----AA---- ----TT---- ----AA---- 可见光激活 识别 ----TT---- ----AA---- 释放 * 烷基化碱基可以直接修复 * 2）嘌呤的直接插入 嘌呤插入酶 受损嘌呤→APS →插入嘌呤（糖苷键） 嘌呤插入酶 K+ * 3）DNA单链断裂重接 DNA单链断裂中有一部分是通过简单的重接而修复的，只需要一种酶——DNA连接酶(ligase)参加，因此也属于直接修复。 DNA连接酶能催化DNA双螺旋结构中一条链缺口处的5’磷酸根与相邻的一个3’羟基形成磷酸二酯健。连接所需的能量ATP(如动物细胞)。 * * 将损伤的部位（或连同其附近的一定部位）切除，然后用正确配对的、完好的碱基替代修复。有多种酶和基因参与 过程：识别（损伤位点）→切除→修复（补）→连接 酶和蛋白质 DNA聚合酶 DNA连接酶 (二)、切除修复 按照产物的不同可以分：碱基切除修复、核苷酸切除修复 * 1)碱基切除： 特点是切除受损伤的碱基。主要过程是水解受损伤的碱基与脱氧核糖磷酸链之间的N—糖苷键。反应由一类糖基化酶催化。 也即：糖基化酶→APS→内、外切酶去除残基→以对侧链为模板修补→DNA连接酶连接 整个修复过程可分以下几步。 * DNA糖苷酶识别切除改变的碱基 核酸内切酶切除磷酸二酯键 DNA聚合酶Ⅰ填补 DNA连接酶连接 * 2.识别的酶： （1）一类DNA糖苷酶，各具特异性 e.g.尿嘧啶DNA糖苷酶—识别DNA中的U （由C突变而来） （2）作用： 识别-----DNA中改变的碱基 水解-----受损的碱基与脱氧核糖间的糖苷键 使受损的碱基脱落 * * E．coli的核苷酸切除修复机理。 在E．coli中，UvrA，UvrB，UvrC三种蛋白必须同时存在才能发挥作用，所以也叫UvrABC切除核酸酶。 UvrA是一种腺苷三磷酸酶，是损伤识别蛋白。它与UvrB 结合成A2B1复合物，结合在损伤区，使DNA解旋、扭曲，并引起UvrB构象改变，与损伤部位形成紧密的结合。 然后UvrA与UvrB—DNA复合物解离，后者成为UvrC特异结合靶。 UvrB 在损伤的3’侧作一内切，随而复合物构象改变， UvrC 得以在5’侧作第二个切口。 解旋酶 Ⅱ(UvrD)使寡聚核苷酸片段及UvrC从DNA链上释放，然后DNA聚合酶Ⅰ取代UvrB。修补缺损区；最后由连接酶连接补片。 2）. 核苷酸切除 * * * 当DNA双链发生严重损伤时需要另一种机理来完成正确的修复。 一种情况是两条链同时受到损伤；另一种情况是单链损伤尚未修复时发生了复制，造成对应于损伤位置的新链缺乏正确模板；此时需要重组酶系将另一段未受损伤的双链DNA移到损伤位置附近，提供正确的模板，进行重组。这便是重组修复。 （三） 重组修复 * 重组修复 (链转移修复) 复制后修复 容易出错 RecA, DNApolymerae ligase 二聚体后起始 RecA 聚合酶、连接酶 重组修复后的损伤位点可 由其它机制进一步修复 * DNA mismatch + ----- A----- - ------C--- DNApol (ξ= 10-8) 经第二次校正ξ= 10-11 错配修复系统(MRS Mismatch Repair System) 错配修复:碱基切除修复的一种特殊形式. 使复制的保真性提高102～103倍 （四）、错配修复 * chemical reactivity of the bases * 吖啶橙插入导致碱基的缺失突变 结合前面错义、移框的抑制突变－－－－