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第三节 紫外-可见分光光度分析方法 一、定性分析 二、定量分析 一、定性分析 （一）定性鉴别 (生色团和助色团及其共轭） 原则：吸收光谱完全相同，则可能是同一种化合物； 如两者有明显差别，则肯定不是同一种化合物。 定性鉴别的依据→吸收光谱的特征 吸收光谱的形状 吸收峰的数目 吸收峰的位置（波长） 吸收峰的强度 相应的吸光系数 续前 1．对比吸收光谱的特征值 续前 2．对比吸光度或吸光系数的比值： 例： 续前 3．对比吸收光谱的一致性 醋酸泼尼松 醋酸氢化可的松 醋酸可的松 同一测定条件下， 与标准对照物谱图或标准谱图 进行对照比较 续前 （二）纯度检查 1．纯度检查（杂质检查） 续前 2．杂质限量的测定： 例：肾上腺素中微量杂质——肾上腺酮含量计算 2mg/mL -0.05mol/L的HCL溶液，λ 310nm下测定 规定 A310≤0.05 即符合要求的杂质限量≤0.06% 二、定量分析 （一）单组分的定量方法 1．吸光系数法 2．标准曲线法 3．对照法 续前 1．吸光系数法（绝对法） 练习 例：维生素B12 的水溶液在361nm处的百分吸光系数为207，用1cm比色池测得某维生素B12溶液的吸光度是0.414，求该溶液的浓度 。 解： 练习 例：精密称取B12样品25.0mg，用水溶液配成100ml。精密吸取10.00ml，又置100ml容量瓶中，加水至刻度。取此溶液在1cm的吸收池中，于361nm处测定吸光度为0.507，求B12的百分含量？ 解： 练习 例： 解： 续前 2．标准曲线法 示例 芦丁含量测定 续前 3．对照法：外标一点法 注：当样品溶液与标准品溶液的 稀释倍数相同时 练习 例： 维生素B12的含量测定 精密吸取B12注射液2.50mL，加水稀释至10.00mL；另配制对照液，精密称定对照品25.00mg，加水稀释至1000mL。在361nm处，用1cm吸收池，分别测定吸光度为0.508和0.518，求B12注射液注射液的浓度以及标示量的百分含量（该B12注射液的标示量为100μg / mL）。 解： 练习 2）吸光系数法 续前 （二）多组分的定量方法 三种情况： 1．两组分吸收光谱不重叠（互不干扰） 两组分在各自λmax下不重叠→分别按单组分定量 续前 2．两组分吸收光谱部分重叠 续前 3．两组分吸收光谱完全重叠——混合样品测定 （1）解线性方程组法 （2）等吸收双波长消去法 （3）系数倍率法 (1)．解线性方程组法 步骤： (2)．等吸收双波长法 步骤： 消除a的影响测b 续前 消去b的影响测a 注：须满足两个基本条件 选定的两个波长下干扰组分具有等吸收点 选定的两个波长下待测物的吸光度差值应足够大 (3)．系数倍率法 前提： 干扰组分b不成峰形 无等吸收点 续前 步骤：b曲线上任找一点→λ1 另一点→λ2 优点：同时将待测组分和干扰组分放大信号K倍， 提高了待测组分测定灵敏度 练习 解： 练习 解： 2．精密称取0.0500g样品，置于250mL容量瓶中，加入 0.02mol/L HCL溶解，稀释至刻度。准确吸取2mL，稀释至 100mL。以0.02mol/L HCL为空白,在263nm处用1cm吸收池 测定透光率为41.7%，其摩尔吸光系数为12000，被测物分 子量为100.0，试计算263nm处 和样品的百分含量。 4.导数光谱法 导数技术 derivative technology 导数分光光度法 derivative spectrophotometry, DS 优点：多组分同时测定； 浑浊样品分析； 消除背景干扰； 复杂光谱辨析等 * * 定性鉴别 纯度检查和杂质限量测定 单组分的定量方法 多组分的定量方法 1）峰位不重叠： 找λ→使主成分无吸收，杂质有吸收→直接考察杂质含量 2）峰位重叠： 主成分强吸收，杂质无吸收 / 弱吸收→与纯品比较，E↓ 杂质强吸收 主成分吸收→与纯品比较，E↑，光谱变形 0.710mg/25mL 1）对照法 4、测定弱酸（碱）离解常数： 例题：配制某弱酸的HCl 0.5mol/L,NaOH 0.5mol/L和邻苯二甲酸氢钾缓冲溶液（pH=4.00）的3种溶液，其浓度均为含该弱酸0.001g/100ml。在λmax=590nm处分别测出其吸光度如表。求该