三区划线与药敏试验.pptVIP

细菌分离培养和接种技术三区划线分离法 原理 操作 7、划线完毕，将平板扣入皿盖并做好标记，置37度温育箱中孵育18-24h，观察琼脂表面菌落分布情况，记录菌落特征。 药敏试验的常用方法 原理 操作 操作 * 胡昊珍 通过在平板上划线，将混杂的细菌在琼脂平板表面充分的分散开，使单个细菌能固定在一点上生长繁殖，形成单个菌落，以达到分离纯种的目的。若需从平板上获取纯种，则挑取一个单个菌落作纯培养。 1、个人防护：正确佩戴口罩、帽子、乳胶手套等个人防护用品。 2、生物安全意识：操作在生物安全柜内进行。 3、标本识别：根据标本信息对平板进行编号。 4、三区划线分离：用接种环将标本涂布于平板1区并做数次密集划线，然后在二三区依次划线，每区之间应烧接种环，每一区划线仅接触上一区域3-4次，使菌量逐渐减少，以获得单个菌落。 5、医疗废弃物处理：使用后标本盖紧盖子放回试管架上或放在黄色医疗垃圾中 6、实验完毕：整理台面，保持台面清洁，脱去个人防护用品，放入黄色医疗垃圾袋。 药敏试验 纸片扩散法 胡昊珍 1. 纸片扩散法 2. 稀释法 3. Etest 法 4. 联合药敏试验 将含有定量抗菌药物的纸片贴在已接种测试菌的琼脂平板上，纸片中所含有的药物吸收琼脂中水分溶解后不断向纸片周围扩散形成递减梯度浓度，在纸片周围抑菌浓度范围内测试菌的生长被抑制，从而形成无菌生长的透明圈即为抑菌圈。 抑菌圈的大小反应测试菌对测定药物的敏感程度，并与该药对测试菌的MIC呈负相关关系。 1、个人防护：正确佩戴口罩、帽子、乳胶手套等个人防护用品。 2、标本识别：根据标本信息对平板进行编号。 3、纸片扩散法药敏试验 （1）接种物制备：挑取经过35度、16-24h孵育的纯培养物，置于无菌生理盐水管中，制备成0.5麦氏浊度标准的菌悬液，15分钟内使用。 （2）接种平板：用无菌棉拭子蘸取菌液，在试管内壁旋转挤去多余菌液，然后在MH琼脂表面均匀涂布接种3次，每次旋转平板60度，最后沿平板内缘涂抹1-2圈，完毕后，室温干燥3-5分钟。 （3）贴药敏纸片：15分钟内用无菌镊子将纸片贴于琼脂表面，各纸片中心距离应大于24mm，纸片距平板内缘大于15mm，纸片贴好后不再移动。 （4）孵育：15分钟内将平板倒置放放入孵育箱。 4、报告结果：35度孵育16-24h后测量抑菌圈直径，在纸质报告单中注明患者姓名、编号等信息，按照CLSI标准判读，将各种抗菌药物按照敏感、中介或耐药报告。 5、医疗废弃物处理：使用过的棉签、菌液等放入消毒液中浸泡。 6实验完毕：整理台面，保持台面清洁，脱去个人防护用品放入黄色医疗垃圾袋。 *