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- 2019-07-16 发布于江苏
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* 考点1 基因工程 专题九 现代生物科技专题 1.基因工程的3种基本工具 (1)限制性核酸内切酶:识别特定核苷酸序列,并在特定位点上切割DNA分子。 (2)DNA连接酶:①E·coli DNA连接酶只能连接黏性末端;②T4 DNA连接酶能连接黏性末端和平末端。 (3)载体:①能在宿主细胞内稳定存在并大量复制;②有一个至多个限制酶切割位点;③具有特殊的标记基因,以便对含目的基因的受体细胞进行筛选。 要点整合 提醒 (1)限制酶≠DNA酶≠解旋酶 限制酶是切割某种特定的脱氧核苷酸序列,并使两条链在特定的位置断开;DNA酶是将DNA水解为基本组成单位;解旋酶是将DNA的两条链间的氢键打开形成两条单链。 (2)使用限制酶的注意点:a.一般用同种限制酶切割载体和目的基因;b.不同的限制酶也能切割出相同的黏性末端。 (3)DNA连接酶≠DNA聚合酶 DNA连接酶连接两个DNA片段,而DNA聚合酶只能将单个脱氧核苷酸添加到脱氧核苷酸链上。 2.基因工程的操作流程 (1)目的基因的获取:①从基因文库中获取。②利用PCR技术扩增。③化学方法人工合成。 提醒 ①PCR技术扩增 a.原理:DNA双链复制。 b.条件:模板DNA、引物、游离的脱氧核苷酸、热稳定DNA聚合酶。 c.过程 变性:90~95 ℃,DNA解链 ↓ 复性:55~60 ℃,引物与单链DNA结合 ↓ 延伸:70~75 ℃,在热
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