微生物碳氮磷测定.docVIP

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微生物碳氮磷测定

土壤微生物量碳氮磷测定方法 试剂配制 微生物量碳试剂: 1 硫酸钾溶液[c(K2SO4)=0.5mol·L-1]:称取硫酸钾(K2SO4,化学纯)87.10g,先溶于300ml去离子水中,加热,转移溶液至容器中,再加少量去离子水溶解余下的部分,转移溶液至同一容器中,如此反复多次。最后定容至1L;(需大量配制) 2 生物量C氧化剂:1.2800g在130℃下烘干两个小时的K2Cr2O7与400mlH2O,2L的优级纯浓硫酸混合,配成2.4L的混合氧化剂溶液,在室温,棕色瓶中保存; 3 葡萄糖标准储备液(100mg/L):准确称取0.2502g的无水葡萄糖溶于1000mL的容量瓶中,存放在4℃冰箱,使用时稀释为所需标准溶液; 微生物量氮试剂: 4 醋酸锂溶液:称取氢氧化锂(LiOH·H2O)168g,加入冰乙酸(优级纯)279mL,,加水稀释到1000mL,用浓盐酸或50%的氢氧化钠溶液调节pH 至5.2; 5 茚三酮试剂:23g分析纯水合茚三酮溶解于750ml二甲基亚砜,加入250ml醋酸锂缓冲液,混合30min,使氧气和氮气排出;(注意此试剂在使用前一天配置,室温下密封保存) 6 氢氧化钠溶液(10mol/L):400g分析纯氢氧化钠溶于去离子水,稀释至1L; 7 柠檬酸缓冲液:42.0g分析纯柠檬酸和16.0g氢氧化钠,溶于900ml去离子水,用10mol/L氢氧化钠调节Ph至5.0,再用水稀释至1L; 8 乙醇溶液:95%分析纯乙醇与去离子水按体积比1:1比例混合; 9 1mg/ml的硫酸铵标准储存液:称取4.7167g分析纯硫酸铵(称前105℃烘2h)溶于0.5moL/L硫酸钾溶液中,并用硫酸钾溶液定容至1000mL,摇匀,于4℃冰箱中保存。 10 0.1mg/ml的硫酸铵[(NH4)2SO4]标准液:吸取10mL1mol/L的硫酸铵标准储存液于100mL容量瓶中,用0.5mol/L硫酸钾溶液定容至100mL.摇匀。此溶液最好现配现用。 11 工作曲线的制备:分别吸取0.00mL、0 .50mL、1.00mL、2.00mL、3.00mL、4.00mL、5.00mL 0.1mg/ml的硫酸铵标准液于1000mL容量瓶中,用0.5moL/L硫酸钾溶液定容至100mL,摇匀。然后取1.5ml,按照样液的步骤进行显色和比色。 微生物量磷试剂: 12 1mol L-1 HCl溶液:用8.33 mL的浓盐酸用蒸馏水定容至100 mL。 13 碳酸氢钠浸提液 [c(NaHCO3)= 0.5mol L-1,pH 8.5]:42.0g分析纯碳酸氢钠溶于800ml蒸馏水,用1mol L-1 NaOH溶液缓慢调节pH至8.5,再用蒸馏水定容至1L。注意该浸提液放置时期过长时,因CO2释放使溶液pH升高。 14 硫酸溶液[c(H2SO4)= 2.5mol L-1]:70.0ml分析纯浓硫酸(H2SO4,ρ= 1.89g ml-1),用蒸馏水稀释定容至500ml。 14 钼酸铵溶液(4%):20.0g分析纯钼酸铵溶于蒸馏水,定容至500ml。 16 抗坏血酸溶液[c(C6H8O6)= 0.1mol L-1]:1.32g抗坏血酸溶于75ml蒸馏水。抗坏血酸溶液极易被氧化,应在使用时当天配制。如需保存可于75ml此溶液中加入25mg乙烯二胺四烷基醋酸二钠和0.5ml蚁酸使其稳定。 17 酒石酸锑钾溶液[ρ(Sb)= 1mg ml-1]:0.2743g分析纯酒石酸锑钾溶于蒸馏水,定容至100ml。 18 混合显色液:取上述125ml硫酸溶液与37.5ml钼酸铵溶液混合,再加入75ml抗坏血酸溶液和12.5ml酒石酸锑钾溶液,混匀。此溶液保存时间不宜超过24h。 19 标准磷酸二氢钾溶液[ρ(KH2PO4)= 4μg P ml-1]:0.1757g分析纯磷酸二氢钾(称量前先经105℃烘2~3h),溶于少量蒸馏水,再加入少量硫酸,用蒸馏水定容至1L,即为40μg P ml-1磷贮存液,置4℃下保存。取50ml贮存液稀释至500ml,即得到浓度为4μg P ml-1磷溶液,此溶液不宜久存。 二、样液制作 1 土壤灭菌 (1)土壤混合均匀后过2mm筛,除去根、秸秆、石头等杂质,烘干法测定土壤样品含水量,以及土壤田间饱和持水量(一般是土壤质量的30%); (2)调节土壤含水量到田间饱和持水量的80%(水稻土适当冷冻干燥)左右。一般调节土壤含水量到25%; (3)每个样品称取相当于10克干土的土壤样品于100毫升塑料瓶中 。(或称10克样品后根据含水量换算); (4)塑料瓶盖上盖(注意盖上要钻孔以防止微波炉加热样品时爆炸),放入微波炉加热; (5)加热量:每1克土800焦耳热量。即为:每1克土应在功率为800W的微波炉加热1秒。每个样品10克土,则为10秒。若有1

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