以蛋白激酶G为靶点的抗结核药物筛选模型的建立和初步应用.pdfVIP

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2019-08-03 发布于天津
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以蛋白激酶G为靶点的抗结核药物筛选模型的建立和初步应用.pdf

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微生物学通报 FEB 20, 2010, 37(2): 312−318 Microbiology China © 2010 by Institute of Microbiology, CAS tongbao@ 主编点评文章以蛋白激酶 G 为靶点的抗结核药物筛选模型的建立和初步应用邵天舒魏玉珍李秋萍赵莉莉岑山余利岩* ( 中国医学科学院医药生物技术研究所北京 100050) 摘要: 结核分枝杆菌可以产生11种丝氨酸/ 苏氨酸蛋白激酶, 其中蛋白激酶G(PknG)对于结核分枝杆菌在巨噬细胞内以“持留”状态长期存活有着重要作用。本研究以结核分枝杆菌基因组 DNA 为模板, 在大肠杆菌中克隆表达了MTB PknG 蛋白, 并分离纯化得到PknG 纯酶。本研究还采用三步级联反应方法测定了PknG 酶活性, 建立和优化了PknG 抑制剂高通量筛选模型。利用此模型共筛选发酵液样品2120 个, 化合物样品 2300 个, 筛选得到阳性化合物 1 个, 阳性发酵液13 个, 阳性率0.32% 。关键词: 药物筛选模型, 持留, PknG The Establishment and Application of Anti-tuberculosis Drugs Screening Model Targeting to PknG * SHAO Tian-Shu WEI Yu-Zhen LI Qiu-Ping ZHAO Li-Li CEN Shan YU Li-Yan (Institute of Medicinal Biotechnology, Chinese Academy of Medical Sciences Peking Union Medical College, Beijing 100050, China) Abstract: Mycobacterium tuberculosis (MTB) PknG, one of 11 Ser/Thr protein kinases produced by MTB, plays an essential role in the residing of MTB in the macrophages as persistent state. In this work, we ampli- fied the pkn G gene from the genome of H37Rv, and constructed a recombinant plasmid pET-pkn G to express the PknG protein in the E. coli . Using purified PknG, we established and optimized a high-throughout screening model to screen for PknG inhibitors. Among 2120 samples of microbial fermentations and 2300 samples of compounds tested, one p